[發(fā)明專利]GPC3單克隆抗體雜交瘤細胞株7D11及其制備方法和應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210086009.X
• 申請日: 2012-03-28
• 公開（公告）號: CN102634486A
• 公開（公告）日: 2012-08-15
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 馬瑞娟;徐偉文;李明
• 申請（專利權(quán)）人: 南方醫(yī)科大學(xué)
• 主分類號: C12N5/20
• 分類號: C12N5/20;C07K16/18;G01N33/68;C12R1/91
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司 44102
• 代理人: 陳衛(wèi)

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及細胞工程技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及GPC3單克隆抗體雜交瘤細胞株7D11及其制備方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)

肝細胞性肝癌（hepatocellular?carcinoma,?HCC）是世界上最常見的惡性腫瘤之一，嚴重危害人類生命健康，有報道顯示，在所有疾病中，肝細胞性肝癌發(fā)病率居第五而病死率高居第三。據(jù)估計，全世界每年有超過100萬新發(fā)現(xiàn)的HCC患者，約100萬人病死。由于HCC早期癥狀和體征不明顯或缺乏特異性，導(dǎo)致HCC的早期診斷率較低，患者就醫(yī)時常為中晚期，喪失治療機會（研究顯示，早中期HCC可手術(shù)治療，小肝癌手術(shù)切除術(shù)后5年生存率大約有62.9%，大肝癌術(shù)后5年生存率則僅為34.6%）。同時，由于HCC對放療和化療均不大敏感，預(yù)后總體較差，外科手術(shù)包括肝移植仍是治療痊愈肝癌的唯一方法。然而，高復(fù)發(fā)與高轉(zhuǎn)移率導(dǎo)致手術(shù)后長期生存率較低，治療效果不理想。在目前治療尚無更好治療策略之際，對高危人群的有效篩選和HCC的早期診斷，是提高生存率、降低病死率的有效途徑。而對小肝癌的早期發(fā)現(xiàn)和診斷，生物標志物最具優(yōu)勢。目前在肝癌診斷中最為經(jīng)典和被公認的是甲胎蛋白AFP，但其陽性檢測率也僅為30~60%，而且特異性不夠，不能滿足臨床對AFP?陰性肝癌的早期診斷。肝癌的致病機理是一個多因素、多步驟的復(fù)雜過程，所以至今仍無一個特異指標能在臨床上應(yīng)用，通過聯(lián)合檢測多種指標可早期發(fā)現(xiàn)肝癌的發(fā)生、復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移，從而進行早期治療。因此，尋找有效診斷和治療靶標，已成為HCC研究的重點、難點及方向。

磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3?(glypican-3，GPC3)?是膜性硫酸乙酰肝素多糖蛋白，在胎兒肝臟表達豐富，在成人肝臟不表達，于肝癌發(fā)生時常常再激活，是HCC發(fā)生發(fā)展中的一個重要物質(zhì)，李慎菁等用Northern?雜交結(jié)果顯示GPC3?基因在正常肝臟組織中不表達，而在肝癌組織中為高表達，并同腫瘤大小及肝癌病理分級呈正相關(guān)，提示GPC3?基因在肝癌發(fā)生發(fā)展中起重要作用，與肝癌的病變程度有關(guān)。這說明該基因有可能是肝癌組織特異性的標志基因，可作為肝癌的臨床早期診斷、治療和判斷惡性程度的參考指標，具有一定的臨床應(yīng)用前景。GPC3不但在腫瘤組織中特異性高表達，同時也可在外周血中被檢測，Capurro等用ELISA法測得53%肝癌患者血清中存在GPC3的C端片段。而在樣本量為53的健康對照組中無一陽性,在樣本量為20的肝硬化患者對照組中僅一例陽性,提示GPC3較高的特異性。Nakatsura等用不同的C2端抗體亦取得相似的結(jié)果。其量的變化又與HCC病灶的存在與否、病情的嚴重程度密切關(guān)聯(lián)（可反映手術(shù)前后的狀態(tài)及治療效果，較AFP敏感）。尤其是GPC3在AFP陰性肝癌中特異性表達，聯(lián)合檢測AFP和GPC3，可顯著提高HCC的診斷檢測率和準確性，因此被認為是一種極具潛能的新穎肝癌標志物。同時，研究還表明GPC3具有較高的免疫原性，在HCC的發(fā)生發(fā)展中起著非常重要的作用，有可能成為肝癌靶向治療的新靶點。

目前可以檢測GPG3的抗體產(chǎn)品均為國外一些公司如BioMosaics的產(chǎn)品，價格昂貴，限制了該蛋白作為臨床靶標驗證及其功能研究方面的應(yīng)用。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于針對現(xiàn)有技術(shù)中的上述不足，提供GPC3（人磷脂酰肌醇蛋白聚糖3）單克隆抗體雜交瘤細胞株7D11。

本發(fā)明的另一目的是提供上述GPC3單克隆抗體雜交瘤細胞株7D11的制備方法。

本發(fā)明的又一目的是提供上述GPC3單克隆抗體雜交瘤細胞株7D11的應(yīng)用。

本發(fā)明通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)上述目的：

GPC3單克隆抗體雜交瘤細胞株7D11，分類命名為磷脂酰肌醇蛋白聚糖3（GPC3）單克隆抗體雜交瘤細胞株7D11，于2011年11月04日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為CGMCC?No.5426，保藏地址：北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號?中國科學(xué)院微生物研究所，本發(fā)明簡稱為GPC3單克隆抗體雜交瘤細胞株7D11。

由上述GPC3單克隆抗體雜交瘤細胞株7D11分泌的單克隆抗體。