[發明專利]GPC3單克隆抗體雜交瘤細胞株7D11及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201210086009.X
• 申請日: 2012-03-28
• 公開（公告）號: CN102634486A
• 公開（公告）日: 2012-08-15
• 發明（設計）人: 馬瑞娟;徐偉文;李明
• 申請（專利權）人: 南方醫科大學
• 主分類號: C12N5/20
• 分類號: C12N5/20;C07K16/18;G01N33/68;C12R1/91
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司 44102
• 代理人: 陳衛

1.GPC3單克隆抗體雜交瘤細胞株7D11，于2011年11月04日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為CGMCC?No.5426。

2.權利要求1所述GPC3單克隆抗體雜交瘤細胞株7D11分泌的單克隆抗體。

3.權利要求1所述GPC3單克隆抗體雜交瘤細胞株7D11的制備方法，其特征在于步驟如下：以GPC3蛋白為免疫原免疫BALB/c小鼠，取血清效價在1:10⁴以上的小鼠脾細胞與SP2/0骨髓瘤細胞進行融合，用含20wt%小牛血清的HAT?RPMI-1640培養基篩選融合細胞，用GPC3蛋白包被ELISA板，間接ELISA法篩選融合細胞培養上清液，選擇效價最高的雜交瘤細胞株進行亞克隆化，有限稀釋法反復克隆至100%細胞陽性率，最后獲得GPC3單克隆抗體雜交瘤細胞株7D11。

4.根據權利要求3所述GPC3單克隆抗體雜交瘤細胞株7D11的制備方法，其特征在于所述GPC3蛋白為重組蛋白，具體制備方法為：以SEQ?ID?NO:1~2所示序列為上下游引物，以Huh7細胞總RNA反轉錄的cDNA為模板，PCR法擴增GPC3基因，擴增產物用EcoRⅠ和?SalⅠ進行雙酶切，酶切產物與經過同樣雙酶切的載體PET-11b連接，得到重組載體GPC3/PET-11b，轉化大腸桿菌，IPTG誘導表達，表達產物經純化得到GPC3重組蛋白。

5.根據權利要求3所述GPC3單克隆抗體雜交瘤細胞株7D11的制備方法，其特征在于小鼠脾細胞與SP2/0骨髓瘤細胞進行融合用50?wt?%?PEG-4000。

6.權利要求2所述GPC3單克隆抗體雜交瘤細胞株7D11分泌的單克隆抗體在檢測GPC3蛋白表達中的應用。

7.一種GPC3免疫檢測試劑盒，其特征在于包括權利要求2所述GPC3單克隆抗體雜交瘤細胞株7D11分泌的單克隆抗體。