[發(fā)明專利]一種參芪扶正注射液HPLC指紋圖譜的構(gòu)建方法及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210083789.2
• 申請日: 2012-03-27
• 公開（公告）號: CN102621244A
• 公開（公告）日: 2012-08-01
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 蘇薇薇;童欣;曹暉;彭維;王永剛
• 申請（專利權(quán)）人: 中山大學(xué)
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 廣州粵高專利商標(biāo)代理有限公司 44102
• 代理人: 陳衛(wèi)

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種參芪扶正注射液HPLC指紋圖譜的構(gòu)建方法，以及由此方法所得到的參芪扶正注射液HPLC標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，屬于藥物分析技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

參芪扶正注射液是以扶正補(bǔ)氣中藥黨參、黃芪為原料制成的中藥大輸液，具有益氣扶正、提高機(jī)體免疫力等作用，主要用于各類腫瘤的輔助治療，在臨床實(shí)踐中證實(shí)其與抗腫瘤藥物聯(lián)合使用時，有減毒增效的作用。同時，也是冠心病、心絞痛、中風(fēng)患者較理想的治療藥物，具有廣闊的臨床應(yīng)用前景。

對中藥注射液質(zhì)量控制方法的深入研究始終是保證其穩(wěn)定性和臨床使用安全性的最重要的問題。在公開的200610098953.1號及200710136382.0的專利申請中均報道了有關(guān)參芪扶正注射液HPLC指紋圖譜的報道。這兩項專利申請公開中記載的方法的不足之處在于：（1）供試品要通過AB-8大孔樹脂柱分離純化或者用水飽和正丁醇萃取4次隨后進(jìn)行濃縮等步驟制備，復(fù)雜繁瑣，高溫濃縮步驟容易引起成分變化，影響方法的重現(xiàn)性。測定有紫外吸收的酚酸類成分與無紫外吸收的皂苷類成分要用同樣繁瑣的方法分別制備供試品溶液，方法存在耗時長，使用有機(jī)溶劑多的缺陷。（2）指紋圖譜采用多達(dá)5個非線性梯度進(jìn)行測定，要用同樣的條件分別測定有紫外吸收的酚酸類成分與無紫外吸收的皂苷類成分，一次測定的時間長達(dá)166分鐘，條件復(fù)雜、耗時太長、耗流動相多、不易重現(xiàn)。（3）指紋圖譜測定方法全程分別紫外208nm、266nm檢測和ELSD檢測，得到3張圖譜，色譜峰信息重疊較多，重復(fù)測定，給分析帶來不便。（4）指紋圖譜所提供的化學(xué)信息不夠，且所提供的色譜峰歸屬較少，僅有毛蕊異黃酮-7-O-β-D葡萄糖苷、黃芪甲苷兩個均歸屬于黃芪的成分得到指認(rèn)，尚無指認(rèn)歸屬于黨參的色譜峰成分。

綜上所述，現(xiàn)有公開的參芪扶正注射液指紋圖譜專利具有較多缺點(diǎn)。

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發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是克服上述現(xiàn)有技術(shù)中的不足，對參芪扶正注射液HPLC指紋圖譜進(jìn)行研究，提供一種操作簡便、快速、重現(xiàn)性好的參芪扶正注射液的HPLC指紋圖譜構(gòu)建方法。該方法采用樣品在線前處理、簡單的HPLC非線性梯度洗脫，在一個流動相系統(tǒng)利用紫外檢測波長切換及DAD?-ELSD檢測器串聯(lián)的方式檢測，一次進(jìn)樣分析得到一張完整的指紋圖譜，即可包涵參芪扶正注射液中各類化學(xué)成分的信息。本發(fā)明所建立的參芪扶正注射液HPLC指紋圖譜能全面地反映參芪扶正注射液的整體質(zhì)量特征，可依據(jù)成品、半成品的指紋圖譜變化來追根溯源尋找工藝操作中的問題，該指紋圖譜化學(xué)成分首次得到99%(已知峰占共有峰峰面積比例)以上的指認(rèn)，可進(jìn)一步運(yùn)用于建立參芪扶正注射液譜效學(xué)質(zhì)量控制新模式的研究，從而全面控制產(chǎn)品的質(zhì)量。因此，新建立的參芪扶正注射液HPLC指紋圖譜方法具有普遍實(shí)用性。

本發(fā)明的目的可以通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：這種參芪扶正注射液HPLC指紋圖譜的構(gòu)建方法，可采用以下步驟：

取參芪扶正注射液樣品經(jīng)0.45μm微孔濾膜濾過，精密吸取75μl，注入雙泵雙梯度高效液相色譜儀測定。色譜條件為采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的色譜柱，柱溫30℃；以乙腈-水為流動相，梯度洗脫，流速為0.6ml/min；以紫外檢測器與蒸發(fā)光散射檢測器串聯(lián)檢測，且紫外檢測波長由266nm?/208nm切換的方式檢測；理論塔板數(shù)按毛蕊異黃酮-7-O-β-D-葡萄糖苷峰計應(yīng)不低于3000。

取腺嘌呤、5-羥甲基糠醛對照品適量，加水制成每1ml含腺嘌呤、5-羥甲基糠醛各0.01mg的混合對照品溶液；取毛蕊異黃酮-7-O-β-D-葡萄糖苷、黨參炔苷、黃芪甲苷對照品適量，加甲醇制成每1ml含毛蕊異黃酮-7-O-β-D-葡萄糖苷0.02mg、黨參炔苷0.05mg、黃芪甲苷0.06mg的混合對照品溶液。對以上對照品溶液按前述方法檢測得到對照品溶液的色譜圖。

對樣品的前處理是運(yùn)用雙泵雙梯度高效液相色譜儀，通過閥切換系統(tǒng)實(shí)現(xiàn)樣品的在線自動凈化。

所述色譜柱包括以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的預(yù)柱和分析柱，通過柱切換技術(shù)，實(shí)現(xiàn)對參芪扶正注射液樣品的自動化前處理及分析。

所述流動相的洗脫梯度如下，其中0～40分鐘為指紋圖譜采集及分析時間，40～60分鐘為洗柱時間，記錄40分鐘色譜圖：