[發明專利]一種參芪扶正注射液HPLC指紋圖譜的構建方法及其應用

有效

• 申請號: 201210083789.2
• 申請日: 2012-03-27
• 公開（公告）號: CN102621244A
• 公開（公告）日: 2012-08-01
• 發明（設計）人: 蘇薇薇;童欣;曹暉;彭維;王永剛
• 申請（專利權）人: 中山大學
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司 44102
• 代理人: 陳衛

1.一種參芪扶正注射液的指紋圖譜的構建方法，其特征包括：取參芪扶正注射液樣品經0.45μm微孔濾膜濾過，精密吸取75μl，注入雙泵雙梯度高效液相色譜儀測定；色譜條件為采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的色譜柱，柱溫30℃；以乙腈-水為流動相，梯度洗脫，流速為0.6ml/min；以紫外檢測器與蒸發光散射檢測器串聯檢測，且紫外檢測波長由266nm?/208nm切換的方式檢測；理論塔板數按毛蕊異黃酮-7-O-β-D-葡萄糖苷峰計應不低于3000。

2.根據權利要求書1所述參芪扶正注射液HPLC指紋圖譜的構建方法，其特征是，所述色譜柱包括以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的預柱和分析柱，樣品的前處理是運用雙泵雙梯度高效液相色譜儀，通過閥切換系統，實現樣品的在線自動凈化；閥切換系統由兩個泵，一根預柱、一根分析柱通過高壓回路轉換閥連接而成，樣品從進樣器進樣后，由裝載泵將預處理流動相2%乙腈帶入預處理柱，被測化合物被保留在預柱上，而水溶性雜質隨預處理流動相排入廢液中，之后將閥切換至與分析柱相接狀態，分析泵用分析流動相將被測組分正沖入分析柱分離分析。

3.根據權利要求書1所述參芪扶正注射液HPLC指紋圖譜的構建方法，其特征是，采用乙腈-水為流動相進行梯度洗脫：0min－5min，乙腈由2%－5%；5min－30min，乙腈由5%－30%；30min－40min，乙腈由30%－60%；40min－40.5min，乙腈由60%－90%；40.5min－50min，乙腈保持90%；50min－50.5min，乙腈由90%－2%；50.5min－60min，乙腈由保持2%；其中0～40分鐘為指紋圖譜采集及分析時間，40～60分鐘為洗柱時間，記錄0～40分鐘的色譜圖。

4.根據權利要求書4所述參芪扶正注射液HPLC指紋圖譜的構建方法，其特征是，以紫外檢測器與蒸發光散射檢測器先后串聯檢測，且紫外檢測波長由266nm?/208nm切換的方式檢測，共檢測出21個共有峰，以[9]號峰毛蕊異黃酮-7-O-β-D-葡萄糖苷為參照，各峰的保留時間與[9]號峰保留時間的比值分別為0.14、0.18、0.25、0.27、0.33、0.41、0.66、0.75、1.00、1.08、1.10、1.12、1.21、1.29、1.31、1.37、1.41、1.53、1.59、1.63、1.69；其中1～9號共有峰，采用266nm檢測得到；10～17號共有峰采用208nm檢測得到；18～21號共有峰采用蒸發光散射檢測器檢測得到。

5.根據權利要求書5所述參芪扶正注射液HPLC指紋圖譜的構建方法，其特征是，對10批參芪扶正注射液進行檢測，用指紋圖譜相似度評價軟件分析得到參芪扶正注射液HPLC標準指紋圖譜，具有21個共有峰；其中，歸屬于黨參的特征峰為?[1]、[5]、[7]、[10]、[13]號峰，共?5個峰；歸屬于黃芪的特征峰為?[3]、[8]、[9]、[11]、[12]、[14]、[15]、[16]、[17]、[18]、[19]、[20]、[21]號峰，共13個峰；兩者共有的有?[2]、?[4]、[6]號峰，共3個峰。

6.根據權利要求書5所述參芪扶正注射液HPLC指紋圖譜的構建方法，其特征是：利用對照品對照法確證3號峰為腺嘌呤、5號峰5-羥甲基糠醛、9號峰為毛蕊異黃酮-7-O-β-D-葡萄糖苷、13號峰為黨參炔苷、14號峰為芒柄花苷、20號峰為黃芪甲苷；利用UFLC-DAD-MS/MS技術手段對共有峰進行色譜峰歸屬及峰純度檢查，紫外吸收曲線的比較，并通過質譜中分子離子峰、碎片離子峰的精確分子量匹配、保留時間匹配、同位素峰匹配信息的比較指證：

266nm：1號峰為胞苷、2號峰為尿嘧啶、3號峰為腺嘌呤、4號峰為鳥苷、5號峰為5-羥甲基糠醛、6號峰腺苷、7號峰為黨參苷Ⅱ、9號峰為毛蕊異黃酮-7-O-β-D-葡萄糖苷；

208nm：10號峰為黨參炔-二-葡萄糖苷、11號峰為異微凸劍葉莎醇-2`，7-二-O-葡萄糖苷、12號峰為櫻花苷、13號峰為黨參炔苷、14號峰為芒柄花苷、15號峰為5-羥基-4`-甲氧基-二氫黃酮-2-α-L-鼠李糖-β-D-葡萄糖苷、16號峰為9,10-二甲氧基紫檀烷-3-?O-β-D-葡萄糖苷、17號峰為異微凸劍葉莎醇-7-O-葡萄糖苷；

ELSD：18號峰為黃芪皂苷Ⅵ、19號峰為黃芪皂苷Ⅶ、20號峰為黃芪甲苷、21號峰為黃芪皂苷Ⅱ。

7.根據權利要求書1～權利要求7所述參芪扶正注射液HPLC指紋圖譜的構建方法在參芪扶正注射液生產或質量檢測中的應用。