[發(fā)明專利]一種雙重病毒滅活制備破傷風人免疫球蛋白的方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201210082835.7 | 申請日： | 2012-03-26 |
| 公開（公告）號： | CN102603891A | 公開（公告）日： | 2012-07-25 |
| 發(fā)明（設計）人： | 呂獻忠;孔冬冬 | 申請（專利權(quán)）人： | 新疆德源生物工程有限公司 |
| 主分類號： | C07K16/12 | 分類號： | C07K16/12;C07K16/06;C07K1/16;A61K39/40;A61P31/04 |
| 代理公司： | 北京中恒高博知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11249 | 代理人： | 高松 |
| 地址： | 830013 新疆維吾爾自*** | 國省代碼： | 新疆;65 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 雙重 病毒 制備 破傷風 免疫球蛋白 方法 | ||
1.一種雙重病毒滅活制備破傷風人免疫球蛋白的方法，其特征在于：包括以下步驟：
1）將原料血漿消毒后稀釋0.3倍，調(diào)pH為7.15-7.25，降溫后噴入95%乙醇，乙醇的終濃度按照體積計為8%，噴入速度小于等于50L/h，再次調(diào)pH至7.15-7.25，并攪拌2小時后離心分離出組分一，離心后得到組分一上清液，離心轉(zhuǎn)速為8000-10000r/min；
2）將步驟1）得到的組分一上清液調(diào)pH為6.85-6.95，噴入95%乙醇，乙醇的終濃度按照體積計為20%，噴入速度小于等于50L/h,再次調(diào)pH為6.85-6.95，并攪拌2小時后靜置2小時，加入硅藻土，加入量為每1000L反應液加入20kg硅藻土，繼續(xù)攪拌20分鐘，壓濾分離出組分二和組分三的沉淀；
3）將步驟2）得到的組分二和組分三的沉淀以氯化鈉溶液溶解，調(diào)pH為5.05-5.15，調(diào)溫度為-0.5℃-0℃，加入95%乙醇至乙醇終濃度按照體積計為17%，而后攪拌2小時，靜置6-12小時，得到組分混合液，將組分混合液壓濾得到組分混合液上清；
4）將步驟3）得到的組分混合液上清脫鹽脫醇后超濾濃縮，得到組分混合濃縮液；
5）將步驟4）得到的組分混合濃縮液以凝膠柱進行層析提純，得到層析蛋白液；
6）將步驟5）得到的層析蛋白液進行透析后，再超濾濃縮，得到層析蛋白濃縮液；
7）將步驟6）得到的層析蛋白濃縮液中加入麥芽糖，調(diào)pH后補水至最終蛋白質(zhì)量百分含量為5.05%-5.2%，除菌，得到免疫球蛋白一級制品；
8）將步驟7）得到的免疫球蛋白一級制品進行孵放滅活，得到免疫球蛋白二級制品；
9）將步驟8）得到的免疫球蛋白二級制品再次以水進行透析并超濾濃縮，得到免疫球蛋白二級制品濃縮液；
10）將步驟9）得到的免疫球蛋白二級制品濃縮液中按每升10-30g加入甘氨酸，并調(diào)pH得到免疫球蛋白三級制品；
11）將步驟10）得到的免疫球蛋白三級制品在無菌條件下進行DV50除病毒，得到破傷風人免疫球蛋白。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的雙重病毒滅活制備破傷風人免疫球蛋白的方法，其特征在于：所述步驟1）中，原料血漿用0.14mol/L氯化鈉溶液稀釋，調(diào)pH所用溶液為pH為4的醋酸緩沖液，降溫至0℃，所用95%乙醇的溫度為-15℃。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的雙重病毒滅活制備破傷風人免疫球蛋白的方法，其特征在于：所述步驟2）中，調(diào)pH所用溶液為pH為4的醋酸緩沖液，所用95%乙醇的溫度為-15℃。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的雙重病毒滅活制備破傷風人免疫球蛋白的方法，其特征在于：所述步驟3）中，氯化鈉溶液的使用量為每kg組分二和組分三的沉淀以9L?0.01mol/L氯化鈉溶液溶解，調(diào)pH所用溶液為pH為4的醋酸鈉溶液。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的雙重病毒滅活制備破傷風人免疫球蛋白的方法，其特征在于：所述步驟4）中，脫鹽脫醇超濾濃縮的具體方法為，用5倍體積的2-8℃的生理鹽水透析。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的雙重病毒滅活制備破傷風人免疫球蛋白的方法，其特征在于：所述步驟5）中，所用凝膠柱為DEAE-SepHarose-FF凝膠柱。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的雙重病毒滅活制備破傷風人免疫球蛋白的方法，其特征在于：所述步驟8）中，孵放病毒滅活條件為pH3.8-4.4，麥芽糖含量為90-110g/L，蛋白濃度為50-52g/L，孵放溫度為23-25℃，孵育時間為21天。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的雙重病毒滅活制備破傷風人免疫球蛋白的方法，其特征在于：所述步驟11）中，DV50除病毒的具體條件為：制品pH為?6.4-7.4，甘氨酸含量為10-30g/L，蛋白濃度為110-150g/L，納米膜孔徑為50納米，過濾溫度為18-20℃，過濾量為200L/1.63?m2，過濾速度小于等于3L/min。
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