[發(fā)明專利]一種樹(shù)上干杏的多倍體誘導(dǎo)方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210081869.4
• 申請(qǐng)日: 2012-03-26
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN102524083A
• 公開(kāi)（公告）日: 2012-07-04
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉敏;王曉軍;寧慧霞;王卉;努爾波拉提;周黎
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)科學(xué)院新疆理化技術(shù)研究所
• 主分類號(hào): A01H4/00
• 分類號(hào): A01H4/00
• 代理公司: 烏魯木齊中科新興專利事務(wù)所 65106
• 代理人: 張莉

1.一種樹(shù)上干杏多倍體的誘導(dǎo)方法，其特征在于按下列步驟進(jìn)行：

a、將樹(shù)上干杏種去除種皮后用100mg/L赤霉素溶液浸泡24h，再用清水浸泡24h進(jìn)行預(yù)處理，然后用清水沖洗5min，在超凈工作臺(tái)上，用濃度為75％乙醇時(shí)間30s，0.1％HgCl₂時(shí)間1min，15％H₂O₂時(shí)間20min依次進(jìn)行消毒，再用無(wú)菌水沖洗6次，然后置于滅菌的濾紙上，待水分晾干接種于MS固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)并置于培養(yǎng)室，培養(yǎng)室溫度為20℃±1℃，光照時(shí)間16h/d，光照強(qiáng)度2000lx，進(jìn)行30天的無(wú)菌培養(yǎng)；

b、將步驟a培養(yǎng)的杏無(wú)菌種子苗，長(zhǎng)到1-2厘米切下，接種到固體培養(yǎng)基QL’+0.1-0.8mg/L6-BA+0.01-0.08mg/LIBA+30mg/L蔗糖+瓊脂7g/L中，pH5.88，進(jìn)行18-25天叢芽繼代培養(yǎng)兩次；

c、將步驟b中的叢芽繼代培養(yǎng)的單苗接種于含有0.2％-0.8％的秋水仙素固體培養(yǎng)基QL’+0.1-0.8mg/L6-BA+0.01-0.08mg/LIBA+30mg/L蔗糖+瓊脂4g/L中，培養(yǎng)時(shí)間18天，溫度25℃±1℃，光照時(shí)間16h/d，光照強(qiáng)度3000lx進(jìn)行誘導(dǎo)兩次，然后對(duì)誘導(dǎo)新葉芽分別按常規(guī)方法進(jìn)行染色體檢測(cè)和流式細(xì)胞儀測(cè)試，以確定誘導(dǎo)苗的倍性；

d、將步驟c誘導(dǎo)苗接入固體培養(yǎng)基1/2DKW+0.1-0.8mg/LIBA，在溫度25℃±1℃暗培養(yǎng)12d進(jìn)行生根；

e、將步驟d生根的單苗，逐一從培養(yǎng)基中輕輕取出，洗去根部所帶的瓊脂，移入含有0.1-0.8mg/LIBA溶液中浸泡4小時(shí)后移栽到草炭土中進(jìn)行溫室煉苗，經(jīng)過(guò)20天組培苗長(zhǎng)出新葉。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于步驟b、c中QL’培養(yǎng)基的組成為：QL’培養(yǎng)基大量元素、DKW培養(yǎng)基的微量元素、DKW培養(yǎng)基的有機(jī)元素和DKW培養(yǎng)基的鐵鹽的混合物。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于QL’培養(yǎng)基中的QL’培養(yǎng)基大量元素為KNO₃、NH₄NO₃、CaNO₃·4H₂O、MgSO₄·7H₂O和KH₂PO₄；DKW培養(yǎng)基的微量元素為MnSO₄·H₂O、Zn(NO₃)₂·6H₂O、Cu?SO₄·5H₂O、H₃BO₃和Na₂MoO₄；DKW培養(yǎng)基的有機(jī)元素為鹽酸硫胺素VB₁、煙酸和甘氨酸Gly；DKW培養(yǎng)基的鐵鹽為乙二胺四乙酸二鈉和FeSO₄·7H₂O。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于步驟c將苗接種于培養(yǎng)基底部，并將培養(yǎng)基覆蓋全苗。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于步驟e溫室為保持溫度15-25℃，濕度80-90％。