[發明專利]一種能促進VBNC細菌生長并提高分離豐度的復蘇培養基及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201210081126.7
• 申請日: 2012-03-26
• 公開（公告）號: CN102618464A
• 公開（公告）日: 2012-08-01
• 發明（設計）人: 丁林賢;陳建榮;金夷;林冬珍
• 申請（專利權）人: 浙江師范大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12Q1/04
• 代理公司: 杭州豐禾專利事務所有限公司 33214
• 代理人: 王從友

1.一種能促進VBNC細菌生長并提高分離豐度的復蘇培養基，其特征在于：該復蘇培養基由培養基基液、細菌液和土壤液構成；所述的細菌液由藤黃微球菌菌種在菌種液體培養基上培養至對數期后期，經離心去除菌種液體培養基提取獲得蛋白質，含有復活促進因子Rpf，細菌液按體積比為培養基基液的0.5-30%；所述的土壤液由經風干、過篩、去除雜質的土壤，加水，多次滅菌，過濾取濾液或離心取上清液，土壤液按體積比為培養基基液的0.1-20%。

2.根據權利要求1所述的一種能促進VBNC細菌生長并提高分離豐度的復蘇培養基，其特征在于細菌液按體積比為培養基基液的1-10%，土壤液按體積比為培養基基液的1-5%。

3.根據權利要求1或2所述的一種能促進VBNC細菌生長并提高分離豐度的復蘇培養基，其特征在于培養基基液選用以下配方中的一種：

A、一般細菌復蘇培養使用的配方：

細菌用胰蛋白胨???8.0~15.0g，

酵母抽提液???????3.0~8.0g，

麥芽提取物???????3.0~8.0g，

牛肉膏???????????1.0~3.0g，

酪蛋白氨基酸?????3.0~8.0g，

甘油?????????????1.0~3.0g，

吐溫-80??????????0.03~0.1g，

七水硫酸鎂???????0.5~2.0g，

加去離子水1000mL，調節pH7.0；

B、適合革蘭氏陽性菌無枝菌酸菌屬的配方：

葡萄糖?????????2.0?~6.0g，

酵母抽提液?????2.0?~6.0g，

麥芽抽提液?????0.6~2.0?g，

蒸餾水?????????1000.0?ml，pH?7.2,?配置瓊脂培養基時加用碳酸鈣1.0?~3.0g；

C、適合革蘭氏陽性菌節桿菌屬、紅球菌、萊夫氏屬、諾卡氏屬、北里孢屬、鏈霉菌屬、枯草桿菌屬、類芽孢桿菌屬的配方：

蛋白胨???????3.0~8.0?g

酵母提取物????1.0~5.5?g，

葡萄糖????????0.5~2.0?g，

β-苯乙醇?????2.0?~4.0ml，

殺真菌素??????0.03~0.08?g，

放線菌酮??????0.02~0.08?g，

去離子水??????1000?ml,pH?7.0；

D、適合貧營養土壤生態中的細菌的配方：

營養肉湯???????1.0~2.50?g，

酵母提取液?????0.20?~1.0g，

蒸餾水?????????1000?ml,pH?7.0；

E、適合貧營養深水生態中的細菌的配方：

酪蛋白?????????1.0~3.0?g，

豆粕???????????0.10~0.50?g，

氯化鈉?????????0.20~1.0?g，

磷酸氫二鉀?????0.1~0.5?g，

葡萄糖?????????0.1~0.5?g，

蒸餾水????????1000?ml，pH?7.3?。

4.根據權利要求3所述的一種能促進VBNC細菌生長并提高分離豐度的復蘇培養基，其特征在于配制固體培養基時，在所述的A、B、C、D或E的各組配方中加瓊脂15~20g，經110~130℃、10~30min高壓滅菌后冷卻使用。