[發明專利]一種植物油中植物甾醇的檢測方法

無效

• 申請號: 201210075758.2
• 申請日: 2012-03-21
• 公開（公告）號: CN102636583A
• 公開（公告）日: 2012-08-15
• 發明（設計）人: 王月華;王萍;王洪堯
• 申請（專利權）人: 山東三星玉米產業科技有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 濟南舜源專利事務所有限公司 37205
• 代理人: 宋玉霞

技術領域

本發明屬于食用油營養添加劑檢測的技術領域，具體的涉及一種植物油中植物甾醇的檢測方法。?

背景技術

植物油是植物甾醇含量較為豐富的食品之一，而其中玉米油中的植物甾醇含量較高。近年來，隨著心血管疾病的頻繁發生，人們的保健意識也隨之增強，植物甾醇作為一種極具營養價值的營養添加劑廣泛用于食品中以降低人體膽固醇。植物甾醇對人體具有較強的抗炎作用，具有能夠抑制人體對膽固醇的吸收、促進膽固醇的降解代謝、抑制膽固醇的生化合成等作用；用于預防治療冠狀動脈粥樣硬化類的心臟病，對治療潰瘍、皮膚鱗癌、宮頸癌等有明顯的療效；可促進傷口愈合，使肌肉增生、增強毛細血管循環；還可作為膽結石形成的阻止劑。?

現有植物甾醇的檢測方法主要有酶法、化學特征反應鑒定法、薄層層析法、紅外光譜法、氣相色譜法等。其中酶法只能測定總甾醇含量，不能檢測各甾醇組分分別的含量，這些方法操作過程復雜，成本高，安全性能差。?

應用化學特征反應鑒定法、薄層層析法、紅外光譜法等普遍存在的缺點是鑒定能力低，對樣品的純度要求高，有的甚至安全性很差。?

應用氣相色譜法檢測因使用高壓以及可燃性氣體，從而對其的安全性要求較高。?

發明內容

本發明的目的在于針對上述存在的缺陷而提供一種植物油中植物甾醇的檢測方法，該方法操作簡單，精確度、安全性高，經濟實惠。?

本發明的技術方案為：一種植物油中植物甾醇的檢測方法，其步驟如下：（1）樣品的處理：首先稱取0.1g～1g樣品放于皂化瓶中，然后在皂化瓶中加入30mL～50mL質量分數為60%?的KOH水溶液和70mL～100mL的無水乙醇（分析純），搖勻，最后加入3～4顆沸石；（2）樣品的皂化：待步驟（1）完成后，將皂化瓶接于回流冷凝管上，在溫度為90℃～100℃的條件下進行皂化，皂化時間為2h～3h；（3）提取皂化物：待步驟（2）皂化完成后，用30mL～50mL的無水乙醚（分析純）提取劑提取皂化瓶中與沸石上的皂化物，將提取液轉入分液漏斗?Ⅰ中，靜置待提取液分層后上層液體留于分液漏斗Ⅰ中，將下層液體移入分液漏斗Ⅱ中，然后在分液漏斗Ⅱ中加入無水乙醚（分析純）進行反復提取3～4次，靜置分層后將分液漏斗Ⅱ中的上層液體與分液漏斗Ⅰ的上層液體合并，得到最終的乙醚提取液；（4）乙醚提取液的處理:用30?mL～50mL質量分數為3%的NaCL水溶液反復清洗步驟（3）所得的乙醚提取液，振蕩分層，棄去下層液體，重復清洗直到棄去的下層液體呈中性，得到的上層液體即為所需提取物；（5）提取物的處理：將步驟（4）中所得的提取物通過盛有5g無水硫酸鈉的過濾器進行過濾，將所得的濾液置于旋轉蒸發器的圓底蒸發瓶中，然后將圓底蒸發瓶連接蒸發儀器進行提取劑無水乙醚的蒸發，待無水乙醚完全蒸發后，得到所需植物甾醇，取下圓底蒸發瓶用純乙醇多次清洗溶解圓底蒸發瓶中的植物甾醇，然后轉入到100mL容量瓶中用純乙醇定容，最后經0.45um的微孔濾膜過濾于25mL容量瓶中，試樣的制備完成；（6）試樣的測試：用進樣針吸取步驟（5）所得的試樣18?uL～22uL，在進樣溫度為40℃～50℃，波長為200?nm?～250nm,流速為0.5?mL/min～1.2mL/min的條件下采用高效液相色譜儀得到色譜圖，然后利用外標法將色譜圖中各甾醇的峰面積與相對應甾醇的標準曲線對照得出試樣中各甾醇的濃度。?

所述步驟（6）中高效液相色譜外標法的標準曲線制備步驟如下：用進樣針分別吸取濃度為1mg/ml、0.8mg/ml、0.6mg/ml、?0.4mg/ml、0.2?mg/ml、0?mg/ml的對照品溶液18?uL～22uL，依照步驟（6）所選定的進樣條件進樣溫度40℃～50℃，波長200?nm?～250nm,流速0.5?mL/min～1.2mL/min，測定各濃度下的峰面積值，以進樣溶液濃度為縱坐標，相應的峰面積為橫坐標，繪制得標準曲線。?

本發明的有益效果為：本發明的檢測方法在提取皂化物時所采用的提取劑為無水乙醚（分析純），無水乙醚的毒性低，價格低廉，氣味比較溫和，對人體沒有太大傷害，并且根據單一變量原則，在本發明所述的檢測步驟及檢測條件下分別采用正己烷、丙酮、乙醚三種不同的提取劑進行對比實驗，得出無水乙醚對甾醇的提取效果好，雜質少，使得后續試樣檢測所出的色譜圖雜質峰少，各甾醇的峰面積大，便于進一步的分析。???

??下面通過三例實驗對比進行詳細說明。