[發(fā)明專利]試劑比色與光譜檢測(cè)相結(jié)合的毒死蜱農(nóng)藥殘留速測(cè)方法

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210073194.9
• 申請(qǐng)日: 2012-03-19
• 公開（公告）號(hào): CN102636482A
• 公開（公告）日: 2012-08-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 孫明;夏錦聞;韓雪
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N21/78
• 分類號(hào): G01N21/78;G01N21/35
• 代理公司: 北京眾合誠(chéng)成知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11246
• 代理人: 史雙元

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于食品安全檢測(cè)領(lǐng)域，特別涉及基于試劑比色與光譜技術(shù)相結(jié)合的一種試劑比色與光譜檢測(cè)相結(jié)合的毒死蜱農(nóng)藥殘留速測(cè)方法。

背景技術(shù)

在世界人口不斷增長(zhǎng)的今天，糧食需求越來越趨于緊張。估計(jì)到2020年，世界糧食需求量將由2000年的19.04億噸增長(zhǎng)至24.87億噸，但耕地卻有減無增。同時(shí)，當(dāng)前在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中遭受病蟲草等危害的情況年年總有發(fā)生。據(jù)統(tǒng)計(jì)，每年全世界因受病蟲草害所減少的糧食產(chǎn)量，約占糧食總量的30％左右。農(nóng)藥在糧食增產(chǎn)方面發(fā)揮著極為重要的作用，可以說如果停止使用農(nóng)藥等化學(xué)品，全世界就會(huì)有上億人面臨著饑餓的威脅，今后在相當(dāng)長(zhǎng)的時(shí)期內(nèi)，農(nóng)藥將是實(shí)現(xiàn)糧食產(chǎn)量增加的重要措施之一。

世界農(nóng)藥產(chǎn)量自1985年以后維持在200-250萬(wàn)噸。我國(guó)自1990年開始，農(nóng)藥產(chǎn)量位于世界第二位，并且由1991年的25.3萬(wàn)噸增加到1999年的42.6萬(wàn)噸。我國(guó)的農(nóng)藥生產(chǎn)使用經(jīng)歷了20世紀(jì)50年代的砷、鉛、汞制劑已于上世紀(jì)70年代起就停止使用；自80年代有機(jī)氯農(nóng)藥由于化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，殘留時(shí)間長(zhǎng)，脂溶性強(qiáng)，且利用率較低，給土壤和農(nóng)業(yè)環(huán)境造成嚴(yán)重污染等原因被停用以后，各類取代農(nóng)藥便得到快速發(fā)展，其中最主要的就是有機(jī)磷農(nóng)藥。

近年來，有機(jī)磷農(nóng)藥的檢測(cè)方法得到迅速發(fā)展。世界各國(guó)的專家都加速開展快速、靈敏、準(zhǔn)確、簡(jiǎn)便的檢測(cè)方法的研究。根據(jù)有機(jī)磷農(nóng)藥的化學(xué)特性和毒理學(xué)性質(zhì)，檢測(cè)有機(jī)磷農(nóng)藥的分析方法主要有波譜法、色譜法和酶抑制法。另外，還有經(jīng)典的化學(xué)比色法、薄層分析法、免疫法等。近年來，生物傳感器技術(shù)因具有靈敏、快速、選擇性高、一般不須對(duì)樣品進(jìn)行預(yù)處理、適合現(xiàn)場(chǎng)和在線檢測(cè)等優(yōu)點(diǎn)，成為研究的熱點(diǎn)。此外，人們還開展了生物芯片技術(shù)的研究。

(1)波譜法

該方法是根據(jù)有機(jī)磷農(nóng)藥中某些官能團(tuán)或水解、還原產(chǎn)物與特殊的顯色劑在一定的條件下，發(fā)生氧化、磺酸化、酯化、絡(luò)合等化學(xué)反應(yīng)，產(chǎn)生特定波長(zhǎng)的顏色反應(yīng)來進(jìn)行定性或定量(限量)測(cè)定。早期所用的只是一種微量化學(xué)試驗(yàn)法。

(2)色譜法

色譜法是目前有機(jī)磷農(nóng)藥的最主要檢測(cè)方法，根據(jù)檢測(cè)過程中的物理化學(xué)特性又可分為薄層色譜法、氣相色譜法和高效液相色譜法三類。

薄層色譜法是一種較為成熟的、應(yīng)用也較廣泛的微量快速檢測(cè)方法，先用適宜的溶劑提取有機(jī)磷農(nóng)藥，經(jīng)純化濃縮后，在薄層硅膠板上分離展開，顯色后再與標(biāo)準(zhǔn)有機(jī)磷農(nóng)藥比較其比移值(Rf)進(jìn)行定性測(cè)定，也可用薄層掃描儀進(jìn)行定量測(cè)定。該方法的特點(diǎn)是經(jīng)濟(jì)、簡(jiǎn)便、快速，但其精確度不是太高，檢出限通常為0.1-0.01ug。

氣相色譜法是進(jìn)入20世紀(jì)50年代以后，在柱層析的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種新型的儀器分析方法，已成為目前典型的、應(yīng)用最廣的儀器分析方法。該方法是利用經(jīng)提取、純化、濃縮后的有機(jī)磷農(nóng)藥注入氣相色譜柱，程序升溫氣化后，不同的有機(jī)磷農(nóng)藥在固定相中分離，經(jīng)不同的檢測(cè)器檢測(cè)掃描繪出氣相色譜圖，通過保留時(shí)間來定性，通過峰高或峰面積與標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)照來定量。該方法的檢測(cè)精度非常高，可以檢出1ng。

高效液相色譜法是在液相柱層析的基礎(chǔ)上，引入氣相色譜理論并加以改進(jìn)而發(fā)展起來的色譜分析方法。與氣相色譜法相比，不僅分離效能好，靈敏度高，檢測(cè)速度快，而且應(yīng)用面廣。但缺點(diǎn)是價(jià)格昂貴，難以大面積推廣。

(3)酶抑制法

酶抑制法是利用有機(jī)磷農(nóng)藥的毒理特性建立的一種快速檢測(cè)方法。由于有機(jī)磷農(nóng)藥可以抑制乙酰膽堿酯酶(Acctylcholinesterase，簡(jiǎn)稱AchE)的活性，在無有機(jī)磷農(nóng)藥存在時(shí)，乙酰膽堿(Acetylcholine，簡(jiǎn)稱：Ach)在AcHE作用下可以產(chǎn)生膽堿和乙酸；當(dāng)有有機(jī)磷農(nóng)藥存在時(shí)，Ache的活性受到抑制，作為其分解產(chǎn)物的乙酸也相應(yīng)減少。利用上述反應(yīng)特性，根據(jù)指示劑顏色或反應(yīng)液pH值的變化，就可以達(dá)到檢測(cè)有機(jī)磷農(nóng)藥的目的。

(4)免疫分析

免疫分析法是利用抗原和相應(yīng)抗體在體外也能特異性結(jié)合的原理發(fā)展起來的一類特異、靈敏、快速的檢測(cè)技術(shù)，由于其內(nèi)在的優(yōu)勢(shì)，廣泛應(yīng)用于包括農(nóng)藥殘留檢測(cè)在內(nèi)的諸多領(lǐng)域。

(5)生物芯片技術(shù)

生物芯片的概念源于計(jì)算機(jī)芯片，生物芯片技術(shù)是在一小片固相載體上儲(chǔ)存大量的生物信息(多至幾十萬(wàn)個(gè))，并與生物化學(xué)處理等技術(shù)相結(jié)合而發(fā)展起來的一種新興技術(shù)。將抗有機(jī)磷抗體固定于生物芯片上，通過被標(biāo)記過的抗原(有機(jī)磷與其他大分子物質(zhì)的結(jié)合物)與抗體的特異性結(jié)合反應(yīng)達(dá)到對(duì)有機(jī)磷的檢測(cè)。