[發明專利]試劑比色與光譜檢測相結合的毒死蜱農藥殘留速測方法

無效

• 申請號: 201210073194.9
• 申請日: 2012-03-19
• 公開（公告）號: CN102636482A
• 公開（公告）日: 2012-08-15
• 發明（設計）人: 孫明;夏錦聞;韓雪
• 申請（專利權）人: 中國農業大學
• 主分類號: G01N21/78
• 分類號: G01N21/78;G01N21/35
• 代理公司: 北京眾合誠成知識產權代理有限公司 11246
• 代理人: 史雙元

技術領域

本發明屬于食品安全檢測領域，特別涉及基于試劑比色與光譜技術相結合的一種試劑比色與光譜檢測相結合的毒死蜱農藥殘留速測方法。

背景技術

在世界人口不斷增長的今天，糧食需求越來越趨于緊張。估計到2020年，世界糧食需求量將由2000年的19.04億噸增長至24.87億噸，但耕地卻有減無增。同時，當前在農業生產中遭受病蟲草等危害的情況年年總有發生。據統計，每年全世界因受病蟲草害所減少的糧食產量，約占糧食總量的30％左右。農藥在糧食增產方面發揮著極為重要的作用，可以說如果停止使用農藥等化學品，全世界就會有上億人面臨著饑餓的威脅，今后在相當長的時期內，農藥將是實現糧食產量增加的重要措施之一。

世界農藥產量自1985年以后維持在200-250萬噸。我國自1990年開始，農藥產量位于世界第二位，并且由1991年的25.3萬噸增加到1999年的42.6萬噸。我國的農藥生產使用經歷了20世紀50年代的砷、鉛、汞制劑已于上世紀70年代起就停止使用；自80年代有機氯農藥由于化學性質穩定，殘留時間長，脂溶性強，且利用率較低，給土壤和農業環境造成嚴重污染等原因被停用以后，各類取代農藥便得到快速發展，其中最主要的就是有機磷農藥。

近年來，有機磷農藥的檢測方法得到迅速發展。世界各國的專家都加速開展快速、靈敏、準確、簡便的檢測方法的研究。根據有機磷農藥的化學特性和毒理學性質，檢測有機磷農藥的分析方法主要有波譜法、色譜法和酶抑制法。另外，還有經典的化學比色法、薄層分析法、免疫法等。近年來，生物傳感器技術因具有靈敏、快速、選擇性高、一般不須對樣品進行預處理、適合現場和在線檢測等優點，成為研究的熱點。此外，人們還開展了生物芯片技術的研究。

(1)波譜法

該方法是根據有機磷農藥中某些官能團或水解、還原產物與特殊的顯色劑在一定的條件下，發生氧化、磺酸化、酯化、絡合等化學反應，產生特定波長的顏色反應來進行定性或定量(限量)測定。早期所用的只是一種微量化學試驗法。

(2)色譜法

色譜法是目前有機磷農藥的最主要檢測方法，根據檢測過程中的物理化學特性又可分為薄層色譜法、氣相色譜法和高效液相色譜法三類。

薄層色譜法是一種較為成熟的、應用也較廣泛的微量快速檢測方法，先用適宜的溶劑提取有機磷農藥，經純化濃縮后，在薄層硅膠板上分離展開，顯色后再與標準有機磷農藥比較其比移值(Rf)進行定性測定，也可用薄層掃描儀進行定量測定。該方法的特點是經濟、簡便、快速，但其精確度不是太高，檢出限通常為0.1-0.01ug。

氣相色譜法是進入20世紀50年代以后，在柱層析的基礎上發展起來的一種新型的儀器分析方法，已成為目前典型的、應用最廣的儀器分析方法。該方法是利用經提取、純化、濃縮后的有機磷農藥注入氣相色譜柱，程序升溫氣化后，不同的有機磷農藥在固定相中分離，經不同的檢測器檢測掃描繪出氣相色譜圖，通過保留時間來定性，通過峰高或峰面積與標準曲線對照來定量。該方法的檢測精度非常高，可以檢出1ng。

高效液相色譜法是在液相柱層析的基礎上，引入氣相色譜理論并加以改進而發展起來的色譜分析方法。與氣相色譜法相比，不僅分離效能好，靈敏度高，檢測速度快，而且應用面廣。但缺點是價格昂貴，難以大面積推廣。

(3)酶抑制法

酶抑制法是利用有機磷農藥的毒理特性建立的一種快速檢測方法。由于有機磷農藥可以抑制乙酰膽堿酯酶(Acctylcholinesterase，簡稱AchE)的活性，在無有機磷農藥存在時，乙酰膽堿(Acetylcholine，簡稱：Ach)在AcHE作用下可以產生膽堿和乙酸；當有有機磷農藥存在時，Ache的活性受到抑制，作為其分解產物的乙酸也相應減少。利用上述反應特性，根據指示劑顏色或反應液pH值的變化，就可以達到檢測有機磷農藥的目的。

(4)免疫分析

免疫分析法是利用抗原和相應抗體在體外也能特異性結合的原理發展起來的一類特異、靈敏、快速的檢測技術，由于其內在的優勢，廣泛應用于包括農藥殘留檢測在內的諸多領域。

(5)生物芯片技術

生物芯片的概念源于計算機芯片，生物芯片技術是在一小片固相載體上儲存大量的生物信息(多至幾十萬個)，并與生物化學處理等技術相結合而發展起來的一種新興技術。將抗有機磷抗體固定于生物芯片上，通過被標記過的抗原(有機磷與其他大分子物質的結合物)與抗體的特異性結合反應達到對有機磷的檢測。