[發明專利]一種利用釀酒酵母表達抗菌肽G13的方法無效
| 申請號： | 201210073067.9 | 申請日： | 2012-03-15 |
| 公開（公告）號： | CN102618551A | 公開（公告）日： | 2012-08-01 |
| 發明（設計）人： | 查向東;盧穎虎;惲輝;余忠麗;趙大偉;程林春;李偉霞;耿玉靜;吳敵;梁琳;馬麗娟;車媛媛 | 申請（專利權）人： | 安徽希普生物科技有限公司 |
| 主分類號： | C12N15/12 | 分類號： | C12N15/12;C12N15/81;C07K7/08 |
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| 地址： | 239000 安徽省*** | 國省代碼： | 安徽;34 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 利用 釀酒 酵母 表達 抗菌 g13 方法 | ||
1.一種利用釀酒酵母表達抗菌肽G13的方法，其特征在于：所述方法包括以下步驟：
a、提供抗菌肽G13基因和α信號肽基因；
b、構建酵母細胞中表達抗菌肽G13的重組質粒pYES2-α-G13；
c、用重組質粒pYES2-α-G13轉化釀酒酵母INVSC1細胞；
d、篩選轉化菌，并進行鑒定；
e、在30℃，200rpm/min的條件下培養轉化菌7～9天，獲得抗菌肽G13；
f、對抗菌肽G13進行鑒定。
2.根據權利要求1所述的一種利用釀酒酵母表達抗菌肽G13的方法，其特征在于：在所述步驟a中所述抗菌肽G13的基因序列為：
CAAAGATCTGTTTCTAATGCTGCTACTAGAGTTTGTAGAACTGGTAGAACTGGTAGATCTAGATGGTAA，利用PCR的方法獲得合成G13序列的模版和引物。
3.根據權利要求1所述的一種利用釀酒酵母表達抗菌肽G13的方法，其特征在于：在步驟a中所述α信號肽基因序列是以質粒pPICZαA中的α信號肽為模版，利用PCR的方法獲得α信號肽片段。
4.根據權利要求1所述的一種利用釀酒酵母表達抗菌肽G13的方法，其特征在于：在步驟c中所述重組質粒的轉化方法是電轉化法，采用Bio-red公司電轉化儀預設PIC程序。
5.根據權利要求1所述的一種利用釀酒酵母表達抗菌肽G13的方法，其特征在于：在步驟d中所述篩選轉化菌的方法為利用酵母尿嘧啶缺陷型最小合成培養基平板培養。
6.根據權利要求1所述的一種利用釀酒酵母表達抗菌肽G13的方法，其特征在于：在步驟e中所述抗菌肽G13存在于培養酵母菌INVSC1的菌液上清中。
7.根據權利要求1所述的一種利用釀酒酵母表達抗菌肽G13的方法，其特征在于：在步驟f中所述抗菌肽G13采用Tricine-SDS-PAGE作為鑒定方法。
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