[發明專利]一種快速檢測重組蛋白表達量的方法

無效

• 申請號: 201210072148.7
• 申請日: 2012-03-18
• 公開（公告）號: CN102654504A
• 公開（公告）日: 2012-09-05
• 發明（設計）人: 李彬;李威
• 申請（專利權）人: 生工生物工程（上海）有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/577
• 代理公司: 上海脫穎律師事務所 31259
• 代理人: 李強

1.一種快速檢測重組蛋白表達量的方法，包括以下步驟：

a)將待檢測的基因工程菌涂布或點種于平板培養基上，并在適合目標蛋白表達的條件下進行培養至單克隆菌落生長至合適大小，獲得克隆平板；

b)將克隆平板上的菌斑影印到印跡膜上；

c)對印跡膜上的菌斑進行原位裂解；

d)利用針對目標蛋白或與目標蛋白融合表達的蛋白標簽的抗體作為一抗對印跡膜進行Western?Blotting檢測；

e)根據Western?blotting檢測結果獲知各單克隆的表達量高低，Western?blotting檢測信號強度越強，則對應克隆中目標蛋白的表達量越高。

2.如權利要求1所述快速檢測重組蛋白表達量的方法，其特征在于，步驟a)所述待檢測的基因工程菌為經驗證轉入了正確表達載體的基因工程菌。

3.如權利要求1所述快速檢測重組蛋白表達量的方法，其特征在于，步驟b)將克隆平板上的菌斑影印到印跡膜上后，將印跡膜倒貼于另一新鮮平板培養基上，并在適合目標蛋白表達的條件下進行培養12-16小時。

4.如權利要求1所述快速檢測重組蛋白表達量的方法，其特征在于，步驟c)所述原位裂解的方法為：將印跡膜浸于細胞裂解液中進行細胞裂解。

5.如權利要求1所述快速檢測重組蛋白表達量的方法，其特征在于，步驟c)對印跡膜上的菌斑進行原位裂解后，將印跡膜晾干。

6.如權利要求1-5任一權利要求所述快速檢測重組蛋白表達量的方法用于判斷目標蛋白的表達與否或用于高表達量克隆的快速篩選的用途。