[發(fā)明專利]用于生產(chǎn)蛋白的轉(zhuǎn)基因蘆薈植物及其相關(guān)的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210071388.5
• 申請日: 2006-09-26
• 公開（公告）號: CN102851306A
• 公開（公告）日: 2013-01-02
• 發(fā)明（設(shè)計）人: W·J·勞瑟;W-S·約;K·洛里克;M·佩奇斯;N·J·勞特
• 申請（專利權(quán)）人: 綠色細胞有限公司
• 主分類號: C12N15/63
• 分類號: C12N15/63;A01G1/00;A01H5/00
• 代理公司: 北京北翔知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11285
• 代理人: 張廣育;姜建成

本申請為分案申請，其原申請的申請日為2006年9月26日，申請?zhí)枮?00680043903.1(國際申請?zhí)朠CT/US2006/037756)，名稱為“用于生產(chǎn)蛋白的轉(zhuǎn)基因蘆薈植物及其相關(guān)的方法”。

相關(guān)專利申請的交叉引用

本專利申請要求2005年9月26日提交的名稱為“TRANSGENIC?ALOE?PLANTS?FOR?PROCUTION?OF?PROTEINS?AND?RELATED?METHODS”并且指定序列號為60/720,540的美國臨時申請的優(yōu)先權(quán)和權(quán)益，該申請全文通過引用的方式納入本文。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及轉(zhuǎn)基因單子葉植物，并且更具體地涉及轉(zhuǎn)基因蘆薈植物，以及用于產(chǎn)生轉(zhuǎn)基因蘆薈植物的方法和組合物，和從所述轉(zhuǎn)基因蘆薈植物提取蛋白的方法。

背景技術(shù)

具有生物活性的蛋白有持續(xù)增長的市場，許多的所述生物活性蛋白被應(yīng)用于治療目的。目前已有超過160種市售的基于蛋白的藥物。未來的兩年，另外還有大約50種有希望被批準(zhǔn)。現(xiàn)在對治療性蛋白生產(chǎn)的需求已經(jīng)超過了工業(yè)的產(chǎn)能。為了克服這個問題，預(yù)計所述工業(yè)的產(chǎn)能需要提高4-5倍。然而，這些治療性蛋白的生產(chǎn)設(shè)備昂貴，并且其建造需要較長的時間。因此，需要更加低成本的生產(chǎn)方法，并且需要所述方法能夠縮短達到大規(guī)模生產(chǎn)所需要的時間。

可以使用一些基于動物的蛋白生產(chǎn)方法。但是，這些方法經(jīng)常會引入疾病造成的健康風(fēng)險。這樣的風(fēng)險可能來自于疾病的交叉感染，所述疾病可以同時感染所述動物和例如人類患者的最終使用者。因此，存在一個對生產(chǎn)方法的需求，所述方法需要消除所述生產(chǎn)生物和所述終端使用者之間的交叉感染的可能性。

另外，許多現(xiàn)有的生產(chǎn)方法需要大量的處理，以從所述動物或產(chǎn)生治療性蛋白的其他宿主生物中提取所述治療性蛋白，并且使所述化合物處于患者可以利用的狀態(tài)。經(jīng)過純化以后，可以將所述蛋白與佐劑或其他載體材料結(jié)合以穩(wěn)定所述蛋白并且使患者可以利用。然而，涉及對治療性蛋白處理的提取、純化、在其他溶劑中的再懸浮的過程是復(fù)雜和繁瑣的，并且可能不利于在對治療有普遍需求的發(fā)展中國家中使用。因此，需要一個簡化生產(chǎn)方法，所述方法可以消除或減少治療性蛋白的提取后處理。

發(fā)明內(nèi)容

根據(jù)本發(fā)明的組合物和方法可以解決上述的許多的需求和缺陷，并且將會提供另外的改進和優(yōu)點，本領(lǐng)域技術(shù)人員通過閱讀本發(fā)明公開的內(nèi)容將會理解這些改進和優(yōu)點。

在一方面，本發(fā)明可以提供一種穩(wěn)定地整合目標(biāo)基因的轉(zhuǎn)基因蘆薈植物。在另一方面，可以提供新的載體和構(gòu)建體，以將目標(biāo)DNA序列整合進蘆薈植物的基因組中。所述目標(biāo)序列可以編碼一種生物活性的蛋白。所述生物活性的蛋白可以是干擾素、免疫球蛋白、淋巴因子、生長因子、激素、血液因子、組織相容性抗原、酶、化妝品用蛋白和其他哺乳動物蛋白，或其他目標(biāo)蛋白。在某些方面，所述目標(biāo)蛋白是人類蛋白。根據(jù)本發(fā)明的蘆薈植物可以將目標(biāo)基因轉(zhuǎn)錄并翻譯成目標(biāo)蛋白。在一方面，至少一些所述的目標(biāo)蛋白可以易位到所述蘆薈葉的中央部分。在其他方面，所述的目標(biāo)蛋白可以包含一個信號序列以便于其易位到所述蘆薈葉的中央部分。在其他方面，可以提供從蘆薈植物上分離單細胞的新方法。仍然在其他的方面，本發(fā)明可以提供新的方法，所述方法用于將載體整合到蘆薈植物中，并且再生這樣的轉(zhuǎn)基因蘆薈植物。

根據(jù)本發(fā)明的產(chǎn)生哺乳動物蛋白的轉(zhuǎn)基因蘆薈植物可以提供用于生產(chǎn)目標(biāo)蛋白的、更加經(jīng)濟的可行的選擇，所述的目標(biāo)蛋白例如各種生物活性的蛋白和化妝品用蛋白。在一方面，所述的目標(biāo)蛋白可以定位于和/或集中在所述蘆薈葉的凝膠中。所述的目標(biāo)蛋白的這種定位可以簡化從所述植物中移出所述蛋白。在這方面，所述的目標(biāo)蛋白可以與位于所述蘆薈葉中央部分的非變性凝膠被共提取。因此，本發(fā)明可以提供一種轉(zhuǎn)基因植物，與例如煙草和玉米的大部分的轉(zhuǎn)基因植物相比，通常可以更容易地從所述轉(zhuǎn)基因植物獲得目標(biāo)蛋白。而且，本發(fā)明可以提供有效的蛋白分離方法。仍然在其他的方面，所述的目標(biāo)蛋白可能不是特別地位于所述蘆薈植物中。然而，所述蘆薈植物的解剖學(xué)和生理學(xué)仍然可以提供生產(chǎn)目標(biāo)蛋白的某些其他的優(yōu)點，本領(lǐng)域的技術(shù)人員通過閱讀本公開內(nèi)容將可以理解這些優(yōu)點。