[發(fā)明專利]用于生產(chǎn)蛋白的轉(zhuǎn)基因蘆薈植物及其相關(guān)的方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201210071388.5 | 申請日： | 2006-09-26 |
| 公開（公告）號： | CN102851306A | 公開（公告）日： | 2013-01-02 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | W·J·勞瑟;W-S·約;K·洛里克;M·佩奇斯;N·J·勞特 | 申請（專利權(quán)）人： | 綠色細胞有限公司 |
| 主分類號： | C12N15/63 | 分類號： | C12N15/63;A01G1/00;A01H5/00 |
| 代理公司： | 北京北翔知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11285 | 代理人： | 張廣育;姜建成 |
| 地址： | 美國*** | 國省代碼： | 美國;US |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 用于 生產(chǎn) 蛋白 轉(zhuǎn)基因 蘆薈 植物 及其 相關(guān) 方法 | ||
1.一種重組DNA構(gòu)建體，包含一個啟動子、一個編碼外源蛋白的序列、一個終止序列和一個編碼一種分泌信號肽的易位序列。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的DNA構(gòu)建體，其中所述啟動子是來自玉米的泛素啟動子(Seq.ID.No?44)。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2的DNA構(gòu)建體，其中所述易位序列是來自水稻(Oryza?sativa)的α淀粉酶分泌序列(SEQ.ID?NO.29)。
4.根據(jù)前述權(quán)利要求任一項的DNA構(gòu)建體，其中所述外源蛋白是一種治療性蛋白。
5.根據(jù)前述權(quán)利要求任一項的DNA構(gòu)建體，其中所述外源蛋白是一種哺乳動物蛋白。
6.根據(jù)權(quán)利要求1、2或3的DNA構(gòu)建體，其中所述外源蛋白是一種干擾素。
7.根據(jù)權(quán)利要求6的DNA構(gòu)建體，其中所述外源蛋白是由SEQ?ID?NO：33編碼的α-2干擾素。
8.根據(jù)權(quán)利要求6的DNA構(gòu)建體，其中所述外源蛋白是一種γ-干擾素。
9.根據(jù)權(quán)利要求1、2或3的DNA構(gòu)建體，其中所述外源蛋白選自免疫球蛋白、淋巴因子、生長因子、激素、血液因子和組織相容性抗原。
10.根據(jù)權(quán)利要求1、2或3的DNA構(gòu)建體，其中所述外源蛋白是由SEQ?ID?NO：36編碼的凝血酶原。
11.根據(jù)權(quán)利要求1、2或3的DNA構(gòu)建體，其中所述外源蛋白是由SEQ?ID?NO：30編碼的皮離蛋白。
12.根據(jù)權(quán)利要求1、2或3的DNA構(gòu)建體，其中所述外源蛋白是由SEQ?ID?NO：32編碼的人生長激素。
13.根據(jù)前述權(quán)利要求任一項的DNA構(gòu)建體，其中所述分泌信號肽是一種包括在所述外源蛋白中的天然的或合成的結(jié)構(gòu)域，所述分泌信號肽指導(dǎo)所述外源蛋白的分泌。
14.根據(jù)權(quán)利要求1-13任一項的DNA構(gòu)建體，其中在所述蛋白從所述蘆薈細胞中易位出來的時候，所述分泌信號肽被從所述目的蛋白上切除。
15.根據(jù)權(quán)利要求1-13任一項的DNA構(gòu)建體，其中在所述蛋白從所述蘆薈細胞中易位出來的時候，所述分泌信號肽保留在所述外源蛋白上。
16.一種轉(zhuǎn)基因蘆薈植物的凝膠，包含：
由一種DNA構(gòu)建體表達的一種外源蛋白，所述DNA構(gòu)建體具有一個啟動子、一個編碼外源蛋白的序列、一個終止序列和一個編碼一種分泌信號肽的易位序列，并且至少部分的所述外源蛋白是從所述轉(zhuǎn)基因蘆薈植物的蘆薈細胞被易位到蘆薈葉的凝膠中。
17.根據(jù)權(quán)利要求16的凝膠，其中所述啟動子是來自玉米的泛素啟動子。
18.根據(jù)權(quán)利要求16或17的凝膠，其中所述外源蛋白是一種治療性蛋白。
19.根據(jù)權(quán)利要求16、17或18的凝膠，其中所述外源蛋白是一種哺乳動物蛋白。
20.根據(jù)權(quán)利要求19的凝膠，其中所述外源蛋白選自于干擾素、免疫球蛋白、淋巴因子、生長因子、激素、血液因子和組織相容性抗原。
21.一種產(chǎn)生轉(zhuǎn)基因的蘆薈植物的方法，所述方法包含：
在一種營養(yǎng)培養(yǎng)基中培養(yǎng)蘆薈細胞的未分化的胼胝體，所述營養(yǎng)培養(yǎng)基包含補充的無機營養(yǎng)素-常量元素和微量元素，包括糖、維生素和輔因子的有機營養(yǎng)素，氨基酸，以及主要是生長素的源和細胞分裂素的源的生長調(diào)節(jié)劑；
在所述胼胝體中引入一種重組DNA構(gòu)建體，所述DNA構(gòu)建體含有一個啟動子、一個編碼外源蛋白的序列、一個終止序列和一個編碼一種分泌信號肽的易位序列；
在生枝和選擇培養(yǎng)基中生長所述胼胝體，所述選擇培養(yǎng)基包含鏈霉素或卡那霉素或乙酰丁香酮，所述生枝培養(yǎng)基是包含0.2mg/l?NAA和2mg/l?BAP的MS培養(yǎng)基或包含0.2mg/l?IAA和2mg/l?BAP的MS培養(yǎng)基；
使所述在生枝和選擇培養(yǎng)基中再生的枝在一種生根培養(yǎng)基中生長，所述生根培養(yǎng)基包含1/2的MS培養(yǎng)基和0.2mg/l的NAA；和
一旦開始形成根，就將所述小植物轉(zhuǎn)移至土壤中。
22.根據(jù)權(quán)利要求21的方法，其中所述啟動子是來自玉米的泛素啟動子(Seq.ID.No?44)。
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