[發明專利]一種棕色棉胚性愈傷組織的誘導和培養方法

無效

• 申請號: 201210071182.2
• 申請日: 2012-03-16
• 公開（公告）號: CN102577979A
• 公開（公告）日: 2012-07-18
• 發明（設計）人: 陳玉梁;陳子萱;羅俊杰;李忠旺;張敏敏;劉新星;厚毅清;王紅梅;裴懷弟
• 申請（專利權）人: 甘肅省農業科學院生物技術研究所
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 北京中恒高博知識產權代理有限公司 11249
• 代理人: 高松

1.棕色棉胚性愈傷組織的誘導和培養方法，其特征在于，包括有以下步驟：

1）棕色棉種子人工脫殼后，再經過消毒處理，得到無菌棕色棉種子，再將無菌棕色棉種子加適量無菌水放入搖床中遮光懸浮暗培養24-36小時，在胚根生長至0.8-1.2cm時，接種于1/2所有元素減半的MSB培養基中，暗培養3-5天，得到2-4cm長的無菌苗下胚軸；

2）將步驟1）得到的無菌苗下胚軸在無菌條件下切為5-8mm小段，并置于棕色棉愈傷組織誘導培養基上進行誘導培養30天，得到初級培養棕色棉愈傷組織；

3）將步驟2）得到的初級培養棕色棉愈傷組織轉接至棕色棉愈傷組織增殖培養基并繼代培養2次，繼代培養周期為25天，得到增殖后棕色棉愈傷組織；

4）將步驟3）得到的增殖后棕色棉愈傷組織轉入棕色棉愈傷組織分化培養基，繼代培養2-3次，繼代培養周期為25天，得到胚性愈傷組織；

5）將步驟4）得到的胚性愈傷組織置于棕色棉胚性愈傷組織增殖培養基上，進行擴繁培養。

2.根據權利要求1所述的棕色棉胚性愈傷組織的誘導和培養方法，其特征在于，所述步驟1）中，

消毒處理的過程為：棕色棉種子先以0.1%的升汞溶液滅菌8-12分鐘，再以無菌水沖洗5-8遍，最后加無菌水在搖床懸浮培養24-36小時至種子胚根伸長；搖床的溫度為27-29℃，速度為120rpm。

3.根據權利要求1或2所述的棕色棉胚性愈傷組織的誘導和培養方法，其特征在于，所述步驟2）中，棕色棉愈傷組織誘導培養基為按照以下比例加入了1.9-3.8g/L?KNO₃、0.75g/L?MgCl₂，同時附加有0.3-0.8mg/L?N6-異戊烯腺嘌呤和0.5-1.5mg/L?吲哚丁酸的MSB培養基。

4.根據權利要求3所述的棕色棉胚性愈傷組織的誘導和培養方法，其特征在于，所述步驟3）中，棕色棉愈傷組織增殖培養基為按照以下比例加入了0.1-0.5mg/L?N6-異戊烯腺嘌呤和0.4-1mg/L?吲哚丁酸的MSB培養基。

5.根據權利要求4所述的棕色棉胚性愈傷組織的誘導和培養方法，其特征在于，所述步驟4）中，棕色棉愈傷組織分化培養基為按照以下比例加入了0.05-0.2mg/L?N6-異戊烯腺嘌呤和0.1-0.5mg/L?吲哚丁酸的MSB培養基。

6.根據權利要求5所述的棕色棉胚性愈傷組織的誘導和培養方法，其特征在于，所述步驟5）中，棕色棉胚性愈傷組織增殖培養基為MSB培養基,其中NH₄NO₃濃度減半，為0.825g/L。