[發明專利]利用SCAR標記鑒定甘蔗抗褐銹病性方法

無效

• 申請號: 201210070465.5
• 申請日: 2012-03-17
• 公開（公告）號: CN102586460A
• 公開（公告）日: 2012-07-18
• 發明（設計）人: 闕友雄;許莉萍;黃寧;陳如凱
• 申請（專利權）人: 福建農林大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 福州元創專利商標代理有限公司 35100
• 代理人: 蔡學俊

技術領域

本發明涉及一種利用分子標記技術鑒定植物抗病性方法，具體涉及利用SCAR標記鑒定甘蔗抗褐銹病性方法，屬于生物技術領域。

背景技術

甘蔗（Saccharum?officinarum）是禾本科甘蔗屬植物，原產于熱帶、亞熱帶地區，具有高光效、光飽和點高、二氧化碳補償點低、光呼吸率低和光合強度大的優點。甘蔗是我國最主要的糖料作物和生物量最高的綠色能源作物，其生產不僅關系我國食糖安全，還能為能源酒精的發展提供充足的原料。

由黑頂柄銹菌（Puccinia?melanocephala）引起的甘蔗褐銹病是我國甘蔗生產中最重要的真菌性病害之一，在國外爪哇、古巴、澳大利亞、美國、墨西哥、印度、泰國和毛里求斯等國家普遍發生并多次爆發流行。該病主要由夏孢子傳播，借風力附著在蔗葉表面，經氣孔侵入。甘蔗褐銹病主要發生在葉片上。初次侵染源主要來自甘蔗本身和其他中間寄主。受褐銹病菌侵染后，侵染初期甘蔗葉片上長出黃色小斑點，色澤呈褐色至橙褐色，周圍有黃色暈環，侵染后期病斑因夏孢子堆呈膿皰狀，最后病斑變黑色，葉組織壞死，使甘蔗葉片失去光合能力，表現早衰，而此時甘蔗正處于大生長期中后期至糖分積累期，因此，不僅造成蔗莖產量損失，還對蔗糖分積累造成嚴重影響，一般減產10-25?%，重的可高達40?%，蔗糖分降低10-36?%。

由于甘蔗褐銹病一般在9月中下旬開始發生，此時甘蔗植株高大，冠層大，化學防治是不可能進行的，成本高，防治效果差。加強田間管理如剝除老葉增加通風等雖然有一定的作用，但是，必然會大幅度增加勞動力成本，蔗農所挽回的損失與人工付出無經濟效益可言，因此，甘蔗生產上根本不可能采用。至于收獲后殘余的蔗葉，目前為了省工節本，一般留在田間，更增加了病害初侵染源。上述原因導致我國蔗區病害脅迫壓力日趨加大，只有培育抗病品種，提高品種對褐銹病的抗性，才能實現對該病害的有效控制，這也是最經濟的甘蔗褐銹病控制策略，而抗病性鑒定的效率和準確性直接影響抗褐銹病育種的進程和效果。

目前，國內外都是采用待鑒定甘蔗材料與感褐銹病甘蔗品種隔行種植，利用自然誘發感病品種發病，為待鑒定抗性的甘蔗基因型提供接種源---夏孢子，而后在整個生長季中，調查不同葉片上病原夏孢子堆所占葉片面積的比例來確定抗性的等級。該方法主要存在的問題：一是耗時長，每個作物季長達1年，且至少需要2個作物季的鑒定結果進行綜合判斷；二是工作量大、占地面積大、管理和調查成本高，難以對大規模的樣品進行鑒定，這與甘蔗雜交育種是以分離世代（即實生苗）大群體為選擇基礎的甘蔗雜交育種相矛盾。就目前而言，我國年定植100萬實生苗，顯然，目前的褐銹病抗性鑒定技術只能在經過多年產量、品質等性狀鑒定選擇后的不多育種材料上進行，也即只能對十來個，最多幾十個育種材料，才能實施對褐銹病抗性的鑒定，因此，必然失去了很多可供選擇的機會；三是在病原、甘蔗基因型和環境三個因素互作的系統中，只有三個因素都具備，病害才能發生，也就是說，即便田間有病原、甘蔗基因型也是感病的，要發生病害，還需要合適的環境條件，三者缺一不可，因此，田間基于誘發的抗病性鑒定方法，鑒定結果難以預料。不同地點、不同年份間的鑒定結果有較大的差異，鑒定結果準確性不夠。因此，研究并開發更高效、準確性更高且不受環境影響的抗褐銹病性鑒定方法，是甘蔗抗褐銹病育種最關鍵的技術。

發明內容

本發明的目的是提供一種利用SCAR標記鑒定甘蔗抗褐銹病性的方法。

本發明利用SCAR標記鑒定甘蔗抗褐銹病性的方法，包括基因組DNA的提取、SCAR-PCR標記的檢測體系建立和SCAR-PCR產物的檢測，其特征在于：

1、??????????????SCAR-PCR標記的檢測：使用的檢測引物是甘蔗SCAR-A和SCAR-B，其中，SCAR-A

是5'-ACTCGGTGTCCTAGTTGTGT-3′，SCAR-B是5'-GGACTCGGTATAGGACATCA-3'；???