[發明專利]重組鏈球菌溶血素O蛋白、核苷酸序列、制備方法及應用在審

申請號：	201210069881.3	申請日：	2012-03-16
公開（公告）號：	CN103304645A	公開（公告）日：	2013-09-18
發明（設計）人：	劉平;余枝廣;黃斌;李印軍;蔡錦剛	申請（專利權）人：	深圳邁瑞生物醫療電子股份有限公司
主分類號：	C07K14/315	分類號：	C07K14/315;C12N15/31;C12N15/63;C12N1/21;C12N5/10;G01N33/68;C12Q1/68;C12R1/46
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地址：	518057 廣東省深圳市南***	國省代碼：	廣東;44
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摘要：
搜索關鍵詞：	重組鏈球菌溶血蛋白核苷酸序列制備方法應用
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【說明書】：

技術領域

本發明涉及生物技術領域，特別是涉及一種重組鏈球菌溶血素O蛋白、該重組蛋白的核苷酸序列、該重組蛋白的制備方法和應用。

背景技術

鏈球菌溶血素O(Streptolysin?O，SLO)是由A群鏈球菌產生的一種外毒素，它是一種具有溶血活性的蛋白質，能溶解人及一些動物的紅細胞。人體感染溶血性鏈球菌后，血清中可出現大量抗鏈球菌溶血素O抗體(Antibodies?Against?Streptolysin?O，ASO)。

在臨床檢測中，ASO是診斷鏈球菌感染后變態反應性疾病(風濕熱、腎小球腎炎)的重要指標之一。常用的ASO檢測方法主要有自動化膠乳比濁法、乳膠凝集試驗、和溶血抑制法。膠乳比濁法由于其敏感性好、結果重復性好、自動化程度高、受人為因素影響小等眾多優點，而作為檢測ASO的最佳方法。

膠乳比濁法檢測ASO的原理是：樣品中的ASO能夠與試劑中的SLO抗原包被的膠乳復合物進行反應，形成抗原-抗體復合物，通過測定吸光度的變化并對照標準品的吸光度變化從而計算出樣品中ASO的活性單位。

膠乳比濁法ASO檢測試劑的生產瓶頸在于SLO抗原的獲得，天然SLO抗原價格昂貴，難于獲得，存在產率低、批間差大等問題，妨礙了ASO檢測試劑的工業化生產。

發明內容

本發明的目的是提供一種重組鏈球菌溶血素O(Streptolysin?O，SLO)蛋白。

本發明的另一目的在于提供一種抗原，一種可編碼表達上述SLO重組蛋白的核苷酸序列，以及包含所述核苷酸序列的載體、重組細胞。

本發明的再一目的在于提供及該重組SLO蛋白的制備方法，以及該重組SLO蛋白及其核苷酸序列在鏈球菌相關檢測等領域的應用和用途。

為了實現上述目的，本發明采用了以下技術方案：

本發明公開了一種重組鏈球菌溶血素O(SLO)蛋白，其在天然鏈球菌溶血素O蛋白的530位包含氨基酸缺失或改變，且缺失了天然鏈球菌溶血素O蛋白N端的77個氨基酸，其中，所述氨基酸的改變為將天然鏈球菌溶血素O第530位的半胱氨酸突變為Xaa，Xaa選自Ala、Arg、Asn、Asp、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val。

進一步的優選，突變為Ser、Thr、Ala中的任一種。

更進一步的優選，突變為Ala。

上述重組SLO蛋白可為SEQ?ID?NO.2所示氨基酸序列的重組SLO蛋白。

本發明還公開了可編碼上述重組SLO蛋白的核苷酸序列。

上述核苷酸序列可為SEQ?ID?NO.1所示核苷酸序列。

上述核苷酸序列還可為SEQ?ID?NO.1所示核苷酸序列進行1個或幾個核苷酸取代而得到的密碼子同義突變的核苷酸序列。

同時，本發明還公開了一種抗原，該抗原的氨基酸序列包含上述重組SLO蛋白的核苷酸序列。

具體的，該抗原的氨基酸序列包含SEQ?ID?NO.2所示序列。

本發明進一步提供了一種載體，該載體包含可編碼上述重組SLO蛋白的核苷酸序列。

具體的，上述載體包含SEQ?ID?NO.1所示核苷酸序列。

該載體可進一步由可編碼上述重組SLO蛋白的核苷酸序列與表達載體經重組得到。所述表達載體為含有轉錄和翻譯插入的編碼序列所需的元件的空載體。

上述表達載體可為pET21W7或pEGFP_BMP7等。