[發明專利]蠟樣芽孢桿菌、阪崎腸桿菌及金黃色葡萄球菌檢測試劑盒及檢測方法

有效

• 申請號: 201210068100.9
• 申請日: 2012-03-15
• 公開（公告）號: CN102747139A
• 公開（公告）日: 2012-10-24
• 發明（設計）人: 吳成貢;盧柳燕;龔劍;田仁鵬;汪再興;黃娟
• 申請（專利權）人: 深圳市生科源技術有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12Q1/14;C12Q1/10;C12Q1/04;C12R1/445;C12R1/085;C12R1/01
• 代理公司: 深圳中一專利商標事務所 44237
• 代理人: 張全文

技術領域

本發明屬于微生物技術領域，尤其涉及一種蠟樣芽孢桿菌、阪崎腸桿菌及金黃色葡萄球菌檢測試劑盒及檢測方法。?

背景技術

蠟樣芽胞桿菌是一種桿狀、產生芽孢的革蘭氏陽性細菌，由于蠟樣芽胞桿菌自然界分布甚廣，常存在于土壤、飛塵、腐草和空氣中，極易在食品加工、運輸、存儲、銷售過程中，通過蒼蠅、蟑螂等昆蟲和不衛生的用具和手污染。在臨床上可導致膿腫、腦膜炎、骨髓炎、心內膜炎等報道，但最常見的是導致不同類型的食物中毒：腹瀉型和嘔吐型。阪崎腸桿菌(又稱阪崎氏腸桿菌)是腸桿菌科的一種，1980年由黃色陰溝腸桿菌更名為阪崎腸桿菌。阪崎腸桿菌能引起嚴重的新生兒腦膜炎、小腸結腸炎和茵血癥，死亡率高達50％以上。金黃色葡萄球菌是人類的一種重要病原菌，隸屬于葡萄球菌屬，有“嗜肉菌″的別稱，是革蘭氏陽性菌的代表。金黃色葡萄球菌致病力強弱主要取決于其產生的侵襲性酶和毒素，可引起局部化膿感染，也可引起肺炎、偽膜性腸炎、心包炎等，甚至敗血癥、膿毒癥等全身感染，中毒癥狀嚴重，主要表現為嘔吐、發熱、腹瀉。?

國際上通用的金黃色葡萄球菌采用培養檢測如下：?

(1)樣品處理：無菌取25g或25mL食品樣品，放入225mL滅菌生理鹽水中均質，制成10-1稀釋液。?

(2)增菌培養：將10-1稀釋液接入7.5％NaCl肉湯或胰蛋白胨肉湯中，37℃培養24小時。?

(3)分離培養：將上述稀釋液或培養液分別劃線血平板和Baird-Parker平板，置37℃培養24～48小時。金黃色葡萄球菌在血平板上呈金黃或白色菌落，大而凸起，表面光滑，周圍有溶血圈。在Baird-Parker平板上菌落為圓形，直徑2～3mm，顏色灰或黑色，周圍有一渾濁帶。?

(4)染色觀察：從平板上挑取可疑性菌落進行革蘭氏染色，金黃色葡萄球菌為革蘭氏陽性，顯微鏡下呈葡萄狀排列無芽胞、莢膜，直徑0.5～1μm。?

(5)血漿凝固酶試驗：吸取0.5mL兔血漿與0.5mL金黃色葡萄球菌肉浸液肉湯24小時培養物充分混勻，置36±1℃培養，每隔半小時觀察一次，連續觀察6小時，出現凝固，即將小試管傾斜或倒置時，內容物不流動，判為陽性。同時做陰陽性對照。?

(6)耐熱核酸酶試驗?

將24小時肉湯培養物沸水浴處理15min，用接種環劃線刺種于甲苯胺蘭-DNA平板，36±1℃培養24小時，在刺種線周圍出現淡粉色者為陽性。本試驗金黃色葡萄球菌為陽性。?

阪崎腸桿菌采用培養法檢測如下：?

(1)前增菌和增菌?

取檢樣100g(mL)加入已預熱至44℃裝有900mL緩沖蛋白胨水的錐形瓶中，用手緩緩地搖動至充分溶解，36℃±1℃培養18h±2h。移取1mL轉種于10mL?ST-Vm肉湯，44℃±0.5℃培養24h±2h。?

(2)分離?

輕輕混勻mLST-Vm肉湯培養物，各取增菌培養物1環，分別劃線接種于兩個阪崎腸桿菌顯色培養基平板，36℃±1℃培養24h±2h。挑取1個～5個可疑菌落，劃線接種于TSA平板。25℃±1℃培養48h±4h。?

(3)鑒定?

自TSA平板上直接挑取黃色可疑菌落，進行生化鑒定。可選擇生化鑒定試劑盒或全自動微生物生化鑒定系統。?

(4)結果與報告?

綜合菌落形態和生化特征，報告每100g(mL)樣品中檢出或未檢出阪崎腸桿菌。?

根據上述通用方法，同時檢測樣品中蠟樣芽孢桿菌、阪崎腸桿菌及金黃色葡萄球菌這三種細菌的周期長(至少48小時)、操作煩瑣、靈敏度低、易污染、程序復雜和所需試劑(生化試驗試劑和血清)繁多等缺點已遠遠不能滿足快速檢測蠟樣芽孢桿菌、阪崎腸桿菌及金黃色葡萄球菌的要求。?

發明內容

有鑒于此，本發明提供一種蠟樣芽孢桿菌、阪崎腸桿菌及金黃色葡萄球菌檢測試劑盒，解決現有技術中同時檢測蠟樣芽孢桿菌、阪崎腸桿菌及金黃色葡萄球菌靈敏的低，周期長等技術問題，以及蠟樣芽孢桿菌、阪崎腸桿菌及金黃色葡萄球菌的檢測方法。?

本發明是這樣實現的，?