[發明專利]用于生產脂肪酶的方法、能產生所述脂肪酶的轉化解脂耶氏酵母細胞以及它們的應用

有效

• 申請號: 201210067382.0
• 申請日: 2006-06-15
• 公開（公告）號: CN102703404A
• 公開（公告）日: 2012-10-03
• 發明（設計）人: 伊夫·勒布隆;尼古拉斯·穆茲;阿蘭·馬蒂;讓·路易·烏里韋拉雷亞
• 申請（專利權）人: 法國米奧里大藥廠
• 主分類號: C12N9/20
• 分類號: C12N9/20;C12N1/19;C12R1/645
• 代理公司: 上海市華誠律師事務所 31210
• 代理人: 傅強國;賈師英

1.一種用于生產重組體脂肪酶的方法，其包括：

a)培養用載體轉化的解脂耶氏酵母細胞的步驟，所述載體包含用于表達酵母耐酸脂肪酶的表達盒，所得到的解脂耶氏酵母細胞是名為YL-LIP2-6C的克隆，所述克隆于2005年12月15日保藏在法國培養物和微生物國家保藏中心(C.N.C.M.)，保藏編號為I-3542；以及

b)從培養液上清液中回收用所述YL-LIP2-6C細胞生產的所述重組體脂肪酶的步驟，

該方法的特征在于，

用于培養的步驟a)是在不含由動物來源的蛋白質材料或它們的酶消化產物所組成的動物來源的產物或未被表征的混合物的培養基中進行的；并且

所述培養基包含：

-作為氮源的無機氮；

-碳源，其選自于碳水化合物來源的碳源、多元醇、以及脂類來源的碳源；以及

-無機鹽和維生素；并且

所述步驟a)包括：

a1)在含有碳水化合物來源的碳源的培養基中預培養所述YL-LIP2-6C細胞；

a2)發酵步驟，包括在含有碳水化合物來源的碳源的培養基中的細胞生長期，以及在含有脂肪酸作為唯一碳源的培養基中的脂肪酶生產期。

2.如權利要求1所述的生產方法，其特征在于，所述無機氮是硫酸銨。

3.如權利要求1所述的生產方法，其特征在于，所述脂肪酸是油酸。

4.如權利要求1所述的生產方法，其特征在于，所述發酵在15％～25％的恒定pO₂和pH小于6.5的條件下進行。

5.如權利要求1所述的生產方法，其特征在于，進行用于預培養的步驟a1)直至OD_600nm值為3～10每1mL，在用于發酵的步驟a2)中，當所述培養液的OD_600nm值達到60～80每1mL時，開始所述脂肪酶生產期。

6.如權利要求1所述的生產方法，其特征在于，當所述OD_600nm值達到300～350每1mL時，進行收集所述脂肪酶的步驟b)。

7.如權利要求1所述的生產方法，其特征在于，步驟b)包括：

b1)從所述培養液上清液中分離所述脂肪酶；以及

b2)純化步驟b1)中得到的脂肪酶。

8.如權利要求7所述的生產方法，其特征在于，采用從中空纖維切向過濾、正面過濾、和連續式或分批式離心中選出的技術來進行所述分離，采用從過濾、分級沉淀、離子交換層析、疏水交互作用層析、和凝膠過濾層析中選出的技術來進行所述純化。

9.一種被載體轉化的解脂耶氏酵母細胞，所述載體包含酵母耐酸胞外脂肪酶的表達盒，其特征在于，所述細胞是名為YL-LIP2-6C的克隆，所述克隆于2005年12月15日保藏在法國培養物和微生物國家保藏中心(C.N.C.M.)，保藏編號為I-3542。

10.如權利要求9所述的細胞用于生產所述酵母耐酸脂肪酶的應用。