[發(fā)明專利]一種用于護唇類化妝產(chǎn)品中沙門菌的檢查方法與驗證

無效

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• 申請日: 2012-03-13
• 公開（公告）號: CN102533931A
• 公開（公告）日: 2012-07-04
• 發(fā)明（設計）人: 張丹;劉海靜;王嫦鶴;李濤;楊靜
• 申請（專利權(quán)）人: 陜西省食品藥品檢驗所
• 主分類號: C12Q1/04
• 分類號: C12Q1/04;C12R1/42
• 代理公司: 西安文盛專利代理有限公司 61100
• 代理人: 彭冬英

技術(shù)領域

一種用于護唇類化妝產(chǎn)品中沙門菌的檢查方法與驗證，屬于生物技術(shù)中食品、化妝品的病原菌檢測技術(shù)領域。

背景技術(shù)

沙門氏菌是一種革蘭陰性兼性厭氧菌，是重要的人畜共患腸道傳染病病原菌，其傳播途徑主要為糞-口傳播，大多數(shù)由食物傳播，少數(shù)介水傳播。世界上最大的一起沙門氏菌食物中毒是1953年于瑞典，由于食用豬肉而引起的鼠傷寒沙門氏菌中毒，7717人中毒，90人死亡。由于沙門氏菌型、菌株不同，使人發(fā)病的菌量也不同，一般食入含10⁶～10⁷cfu/g沙門菌的食品即可發(fā)病。據(jù)報道，沙門氏菌病為歐盟第二大爆發(fā)頻繁的人畜共患傳染病。2005年，平均發(fā)病率為每10萬人口發(fā)生38.2例。人畜感染沙門氏菌后可呈無癥狀帶菌，也可表現(xiàn)為有臨床癥狀的致死疾病，它可能加重病態(tài)或死亡率或者降低動物的繁殖生產(chǎn)力，給國家經(jīng)濟造成巨大損失，同時嚴重威脅著人民的身體健康。

護唇類化妝品如唇彩，唇膏，唇線筆，口紅等系列產(chǎn)品，其組分配方中多含有角沙烷，膠原，尿囊素，軟骨素硫酸等動物組織或提取物，由于其使用的特殊性，可能會有一部分被食入口中，引起細菌的感染。而沙門氏菌作為護唇類化妝品中主要的病原菌之一，可通過人、畜、禽類糞便或帶菌接觸，對人類具有明確的腸道致病意義，甚至也可導致局部感染，應對其進行方法學驗證及檢查。目前，在我國化妝品標準規(guī)范中，對這種含有動物組織包括提取物的護唇類產(chǎn)品，其微生物檢驗方法中卻沒有沙門氏菌的檢驗方法。國內(nèi)、外的文獻報道及專利記載中均沒有護唇類化妝品中沙門氏菌的檢驗方法報道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種用于護唇類化妝產(chǎn)品中沙門菌的檢查方法與驗證。

本發(fā)明的技術(shù)方案：一種用于護唇類化妝產(chǎn)品中沙門菌的檢查方法與驗證，所述的檢測步驟如下：

1.1菌液制備方法??按《中國藥典》2010年版二部附錄微生物限度檢查試驗菌液的制備方法，取經(jīng)30～35℃培養(yǎng)18～24小時的沙門菌營養(yǎng)肉湯新鮮培養(yǎng)物1ml，加入9ml質(zhì)量體積百分比0.9％的無菌氯化鈉溶液中，10倍稀釋制成10～100cfu的菌懸液備用；

1.2試驗組

1.2.1前增菌和增菌??取供試品10g，加入無菌聚山梨酯-80和無菌液體石蠟各10ml，研磨至粘稠狀后加入70ml胰酪胨大豆肉湯培養(yǎng)基中混勻溶解，再加入試驗用沙門氏菌懸液10～100cfu?1ml于36±1℃?18～24小時培養(yǎng)，取10ml培養(yǎng)物加四硫磺酸鈉煌綠增菌培養(yǎng)基(TTB)至100ml，42℃培養(yǎng)18～24小時；另取10ml培養(yǎng)物加氯化鎂-孔雀綠沙氏增菌培養(yǎng)基(RVS)至100ml，36±1℃培養(yǎng)18～24小時；

1.2.2分離?取上述兩種增菌培養(yǎng)物各1環(huán)，接種于1個亞硫酸鉍瓊脂培養(yǎng)基(BS)和1個Hektoen-腸道瓊脂培養(yǎng)基(HE)平板上，36±1℃分別培養(yǎng)40～48小時(BS)和18～24小時(HE)，觀察各平板上生長的菌落，結(jié)果Hektoen-腸道瓊脂培養(yǎng)基(HE)平板上生長的菌落中心為黑色，亞硫酸鉍瓊脂培養(yǎng)基(BS)平板上生長的菌落為黑色且有金屬光澤，菌落周圍培養(yǎng)基為棕色或黑色；

1.2.3初步鑒定試驗??從Hektoen-腸道瓊脂培養(yǎng)基(HE)和亞硫酸鉍瓊脂培養(yǎng)基(BS)平板上各挑取2～3個菌落至三糖鐵(TSI)瓊脂斜面培養(yǎng)基上穿刺劃線培養(yǎng)18～24小時，觀察結(jié)果，Hektoen-腸道瓊脂培養(yǎng)基(HE)和亞硫酸鉍瓊脂培養(yǎng)基(BS)平板上的培養(yǎng)物在三糖鐵(TSI)瓊脂斜面培養(yǎng)基上底層均為黑色，斜面和底層為黃色均產(chǎn)氣(H₂S)；

1.2.4鏡檢??挑取三糖鐵(TSI)瓊脂斜面培養(yǎng)基上生長的疑似單個菌落接種至營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基平板上，于36±1℃18～24小時培養(yǎng)，做革蘭染色鏡檢，觀察，結(jié)果為革蘭染色陰性無芽孢短桿菌；

1.2.5生化試驗

(1)靛基質(zhì)試驗??挑取少量TSI三糖鐵瓊脂斜面上的培養(yǎng)物，接種于蛋白胨水培養(yǎng)基4ml/管中，于36±1℃培養(yǎng)1～2天，必要時可延長至4～5天，加入柯凡克試劑約0.5ml，輕搖，觀察結(jié)果，試劑層呈無色；

(2)尿素酶試驗??挑取少量TSI三糖鐵瓊脂斜面上的培養(yǎng)物，接種于尿素瓊脂斜面培養(yǎng)基上，于36±1℃培養(yǎng)24小時，觀察結(jié)果，培養(yǎng)基未產(chǎn)堿變色；