[發明專利]蛋白酶抑制劑BmSPI38及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201210063274.6
• 申請日: 2012-03-12
• 公開（公告）號: CN102532305A
• 公開（公告）日: 2012-07-04
• 發明（設計）人: 趙萍;李游山;夏慶友;向仲懷
• 申請（專利權）人: 西南大學
• 主分類號: C07K14/81
• 分類號: C07K14/81;C12N15/15;C12N15/63;C12N15/70;C12N1/21;A61K38/57;A61P31/10;C12N15/85;A01K67/04;C12R1/19
• 代理公司: 北京同恒源知識產權代理有限公司 11275
• 代理人: 趙榮之

1.蛋白酶抑制劑BmSPI38，由SEQ?ID?No.2中第23位至第80位氨基酸組成。

2.根據權利要求1所述的蛋白酶抑制劑BmSPI38，其特征在于，在N末端還有信號肽序列，所述信號肽序列由SEQ?ID?No.2中第1位至第22位氨基酸組成。

3.編碼權利要求1所述的蛋白酶抑制劑BmSPI38的基因。

4.根據權利要求3所述的基因，其特征在于，由SEQ?ID?No.1中第137位至第313位核苷酸組成。

5.根據權利要求4所述的基因，其特征在于，在5’末端還有信號肽編碼序列，由SEQ?ID?No.1中第71位至第136位核苷酸組成。

6.根據權利要求5所述的基因，其特征在于，其cDNA全長序列由SEQ?ID?No.1中第1位至第388位核苷酸組成。

7.含有權利要求3至6任一項所述基因的重組表達載體。

8.根據權利要求7所述的重組表達載體，其特征在于，以p28質粒作為基礎載體，所述p28質粒由pET28a質粒刪減部分多克隆位點后獲得，刪減后的多克隆位點序列如SEQ?ID?No.10所示。

9.含有權利要求7或8所述重組表達載體的工程菌。

10.根據權利要求9所述的工程菌，其特征在于，以大腸桿菌Origami?2(DE3)菌株為宿主菌。

11.權利要求1所述蛋白酶抑制劑BmSPI38的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：將由SEQ?ID?No.1中第137位至第313位核苷酸組成的基因克隆入p28質粒的多克隆位點，獲得重組表達載體BmSPI38-p28，再將重組表達載體BmSPI38-p28轉入大腸桿菌Origami?2(DE3)菌株，獲得工程菌BmSPI38-p28-Origami?2(DE3)，再用終濃度為0.2mM的異丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷于16℃誘導表達20小時，收集誘導表達后的菌體，超聲破碎，離心，收集上清，用Ni²⁺-NTA?親和層析純化，即制得蛋白酶抑制劑BmSPI38；所述p28質粒由pET28a質粒刪減部分多克隆位點后獲得，刪減后的多克隆位點序列如SEQ?ID?No.10所示。

12.權利要求1所述的蛋白酶抑制劑BmSPI38和權利要求3所述的基因在制備枯草桿菌蛋白酶類蛋白酶抑制劑中的應用。

13.根據權利要求12所述的應用，其特征在于，所述枯草桿菌蛋白酶類蛋白酶為枯草桿菌蛋白酶、蛋白酶K、球孢白僵菌體壁降解蛋白酶CDEP-1和蜂蜜曲霉蛋白酶。

14.權利要求1所述的蛋白酶抑制劑BmSPI38和權利要求3所述的基因在制備球孢白僵菌體壁降解蛋白酶CDEP-1誘導的殺蟲性黑化反應阻斷劑中的應用。

15.根據權利要求14所述的應用，其特征在于，所述CDEP-1誘導的殺蟲性黑化反應為CDEP-1誘導的家蠶黑化反應。

16.權利要求3所述的基因在培育具有致病真菌抗性的家蠶品系中的應用。