[發明專利]尿層粘連蛋白在制備診斷膀胱癌的醫療器械中的應用

有效

• 申請號: 201210063256.8
• 申請日: 2012-03-12
• 公開（公告）號: CN102621307A
• 公開（公告）日: 2012-08-01
• 發明（設計）人: 沈周俊;張敏光;周春洪
• 申請（專利權）人: 沈周俊;張敏光;周春洪
• 主分類號: G01N33/574
• 分類號: G01N33/574;G01N33/558
• 代理公司: 上海卓陽知識產權代理事務所(普通合伙) 31262
• 代理人: 金重慶

技術領域

本發明涉及尿層粘連蛋白的應用，具體地說，是尿層粘連蛋白在制備診斷膀胱癌的醫療器械中的應用，以及一種膀胱癌診斷試紙及其應用。

背景技術

膀胱尿路上皮癌是泌尿系統最常見的惡性腫瘤，是男性第6、女性第10高發腫瘤。首次治療后復發率高達80%。因此，術后隨訪是治療的重要內容。目前膀胱癌的診斷主要依靠尿道膀胱鏡+尿脫落細胞檢查。但膀胱鏡檢查創傷大、費用高，有一定的并發癥，能堅持按照醫囑檢查的只有患者40%左右；且膀胱鏡檢查不易發現早期、特殊部位的膀胱癌病灶。尿脫落細胞檢查雖然是一種無創性檢查，但其診斷的靈敏度只有30%左右，且受檢查者的影響因素較大，并不是一種理想的診斷方法。臨床上迫切需要一種靈敏度和特異度較高的無創性診斷方法。

腫瘤微環境是腫瘤發生、發展過程中所處的環境，主要由細胞外基質（ECM）、成纖維細胞、血管內皮細胞和免疫細胞組成。腫瘤微環境提供了腫瘤快速生長所需要的“土壤”；同時腫瘤侵襲、浸潤和轉移過程中伴隨著腫瘤微環境成分及結構的變化。基膜（basal?lamina,?BM）是由多種纖維蛋白構成的復雜的細胞外結構，位于上皮細胞基底面與結締組織的膜狀結構，是ECM的重要組成部分。BM不僅對組織細胞起支持連接作用，同時具有滲透性屏障的作用，是物質通透的半透膜，并調節多種分子及細胞的活動。基膜是由不同蛋白纖維組成的網狀結構，主要成分有層粘連蛋白（laminin,?LN）、Ⅳ型膠原、巢蛋白、肌腱蛋白、鈣結合蛋白、硫酸肝素糖蛋白等。LN在基膜的形成中起重要作用，因為LN具有許多不同的結構域,其中具有與其他蛋白復合物結合的特殊位點。此外，LN能夠同細胞表面受體結合，也能夠同其他的LN分子以及同其他的糖蛋白,包括基膜中其他的一些成份結合。更重要的是，LN同Ⅳ型膠原結合，形成分隔的交聯網狀結構，形成的基膜通過LN與細胞表面受體緊密結合，將基膜與覆蓋的細胞緊密結合起來。因此，LN不僅是基膜的主要成分，也是基膜的組織者,而Ⅳ型膠原則是基膜的網狀鋼架。

層粘連蛋白（laminin,?LN）主要存在于基膜結構中，是基膜所特有的非膠原糖蛋白，相對分子質量為820kDa，含13-15%的糖，有三個亞單位，即重鏈(α?鏈,?400kDa)和β1(215kDa)、β2(205kDa)兩條輕鏈。結構上呈現不對稱的十字形,?由一條長臂和三條相似的短臂構成。這四個臂均有棒狀節段和球狀的末端域。β1和β2短臂上有兩個球形結構域，α鏈上的短臂有三個球形結構域，其中有一個結構域同Ⅳ型膠原結合，第二個結構域同肝素結合，還有同細胞表面受體結合的結構域。正是這些獨立的結合位點使?LN作為一個橋梁分子，介導細胞同基膜結合。

LN的主要功能就是作為基膜的主要結構成分對基膜的組裝起關鍵作用,?在細胞表面形成網絡結構并將細胞固定在基膜上。LN還有許多其他的作用,如在細胞發育過程中刺激細胞粘著、細胞運動。LN還能夠刺激胚胎中神經軸的生長,并促進成年動物的神經損傷后重生長和再生。如同纖粘連蛋白,細胞外的LN能夠影響細胞的生長、遷移和分化。LN在原生殖細胞的遷移中起關鍵作用。

基膜與腫瘤的關系比較復雜。基膜存在于上皮基底部及腫瘤細胞間，支持和營養腫瘤組織，同時參與腫瘤細胞及血管內皮細胞的黏附增殖，與腫瘤的生長及惡化密切相關。腫瘤細胞和內皮細胞內LN的表達明顯上調，但LN也能促進間質金屬蛋白酶（MMP）的表達，MMP能降解基膜成分，從而有利于腫瘤細胞向周圍組織的浸潤及血管芽的新生。

有研究發現，膀胱癌進展過程中伴隨基膜的破壞，膀胱癌組織中基膜的破壞與腫瘤的侵襲和轉移密切相關，基膜中LN和Ⅳ型膠原的表達可作為腫瘤生物學特性的預后指標。

因為膀胱癌細胞及內皮細胞中LN表達上調，同時伴隨腫瘤進展、基膜破壞，LN降解增多，我們認為，膀胱癌病人尿液中LN水平可能增高，尿LN有可能成為膀胱癌腫瘤標記物。

中國專利文獻CN101634655A公開了一種快速診斷膀胱癌的FN試紙及其應用，包括底板、樣品墊、金膠墊、硝酸纖維膜層和吸水紙層，所述的金膠墊中含有膠體金與抗尿纖維連接蛋白抗體結合的金標抗體復合物，用于快速診斷膀胱癌。孫方滸等采用免疫組化方法觀察膀胱移行細胞癌中組織蛋白酶D和層粘連蛋白（LN）的表達，提出LN表達可作為腫瘤生物學特性的預后指標（詳見孫方滸等.組織蛋白酶D和層粘連蛋白在膀胱癌中的表達及意義.中華泌尿外科雜志,?2002,?23(4):?237-237.）。但是關于尿層粘連蛋白在制備診斷膀胱癌的醫療器械中的應用目前還未見報道。

發明內容

本發明的目的是針對現有技術中的不足，提供一種尿層粘連蛋白LN1的應用。