[發明專利]檢測泡型包蟲病的免疫層析試條及制備方法

無效

• 申請號: 201210062778.6
• 申請日: 2012-03-12
• 公開（公告）號: CN102608330A
• 公開（公告）日: 2012-07-25
• 發明（設計）人: 汪俊云;高春花;石鋒;楊玥濤;丁丹
• 申請（專利權）人: 中國疾病預防控制中心寄生蟲病預防控制所
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/558;C12N15/12;C12N15/63;C07K14/435
• 代理公司: 上海世貿專利代理有限責任公司 31128
• 代理人: 嚴新德

1.一種檢測泡型包蟲病的免疫層析試條，包括一個樣品墊和一個吸水墊，在所述的樣品墊和吸水墊之間設置有一個纖維素膜，吸水墊和所述的纖維素膜緊密連接，在樣品墊和纖維素膜之間設置有一個金標墊，所述的樣品墊、金標墊和纖維素膜之間緊密連接，在纖維素膜上靠近吸水墊的一端設置質控線，在所述的質控線和金標墊之間的纖維素膜上設置一條檢測線，其特征在于：所述的檢測線含有重組的泡型包蟲病的抗原Em18，所述的金標墊上設置有膠體金標記的探針，所述的質控線含有能與膠體金標記探針特異性結合的抗體或抗抗體。

2.如權利要求1所述的檢測泡型包蟲病的免疫層析試條，其特征在于：所述的樣品墊、金標墊、纖維素膜和吸水墊設置在一個背板上。

3.如權利要求1所述的檢測泡型包蟲病的免疫層析試條，其特征在于：所述的纖維素膜的一端設置在所述的金標墊的下側，所述的金標墊的一端設置在所述的樣品墊的下側。

4.如權利要求1所述的檢測泡型包蟲病的免疫層析試條，其特征在于：所述的膠體金標記的探針是以人IgG為抗原免疫動物獲得的抗體、或金黃色葡萄球菌A蛋白、或鏈球菌G蛋白。

5.如權利要求4所述的檢測泡型包蟲病的免疫層析試條，其特征在于：所述的膠體金標記探針是以人IgG作為抗原免疫小鼠獲得的單克隆抗體，所述的質控線含有羊抗鼠抗抗體。

6.如權利要求4所述的檢測泡型包蟲病的免疫層析試條，其特征在于：所述的質控線含有抗金黃色葡萄球菌A蛋白抗體、或抗鏈球菌G蛋白抗體。

7.如權利要求1所述的檢測泡型包蟲病的免疫層析試條，其特征在于：重組的泡型包蟲病的抗原Em18的蛋白濃度為0.1-10mg/mL，噴涂量為8-12μL/cm，膠體金標記探針的濃度以蛋白濃度計為1-5mg/15-20mL。

8.如權利要求5所述的檢測泡型包蟲病的免疫層析試條，其特征在于：所述的羊抗鼠抗抗體溶液的濃度為0.1-5mg/mL，噴涂量為8-12μL/cm。

9.如權利要求6所述的檢測泡型包蟲病的免疫層析試條，其特征在于：抗金黃色葡萄球菌A蛋白抗體或抗鏈球菌G蛋白抗體溶液濃度為0.1-5mg/mL，噴涂量為8-12μL/cm。

10.一種制備權利要求1所述的檢測泡型包蟲病的免疫層析試條的方法，其特征在于：包括一個制備重組的泡型包蟲病的抗原Em18的步驟、一個制備膠體金標記探針的步驟和一個制備與膠體金標記探針特異結合的抗抗體的步驟，在上述步驟完成之后，將重組的泡型包蟲病的抗原Em18溶液噴涂到纖維素膜上形成檢測線，將能與膠體金標記探針特異結合的抗體或抗抗體溶液噴涂到靠近吸水墊的纖維素膜上形成質控線，所述的質控線和檢測線相鄰設置，將噴涂有檢測線、質控線的纖維膜在相對濕度40％以下的環境中干燥1-2小時，然后進行制備金標墊的步驟，在所述的制備金標墊的步驟中，將玻璃纖維膜或聚脂膜浸入膠體金標記的探針溶液中，取出后將金標墊在相對濕度40％以下的環境中干燥1-2小時，吸水墊粘貼在所述纖維素膜的靠近質控線的一端，將金標墊粘貼在纖維素膜的靠近檢測線的一端，將樣品墊粘貼于金標墊的遠離纖維素膜的一端，得到檢測泡型包蟲病的免疫層析試條。

11.如權利要求10所述的制備檢測泡型包蟲病的免疫層析試條的方法，其特征在于：所述的重組的泡型包蟲病的抗原Em18按如下方法制備：將感染泡型包蟲病的羊肝多房棘球蚴原頭節用試劑盒進行原頭節總RNA的抽提，以反轉錄試劑盒進行反轉錄合成cDNA第一鏈，上游引物序列如SEQ?ID?NO：1所示，下游引物序列如SEQ?IDNO：2所示，在上游引物中引入了BamHI位點，在下游引物中引入了EcoRI酶切位點，以合成cDNA第一鏈為模板，RT-PCR方法擴增目的基因片段。

12.一種試劑盒，包括一個盒體，其特征在于：將權利要求1所述的檢測泡型包蟲病的免疫層析試條設置在所述的盒體中，所述的盒體的一個側面上設置有一個加樣孔和一個觀察孔，所述的加樣孔位于樣品端吸水墊的上方，所述的觀察孔位于所述的檢測線和質控線的上方。

13.一種檢測泡型包蟲病的試劑，其特征在于：包括以下組分：

1)重組的泡型包蟲病的抗原Em18，所述的重組的泡型包蟲病的抗原Em18的核苷酸序列如SEQ?ID?NO：3所示；

2)膠體金標記探針。

14.如權利要求13所述的檢測泡型包蟲病的試劑，其特征在于：所述的重組的泡型包蟲病的抗原Em18按如下方法制備：將感染泡型包蟲病的羊肝多房棘球蚴原頭節用試劑盒進行原頭節總RNA的抽提，以反轉錄試劑盒進行反轉錄合成cDNA第一鏈，上游引物序列如SEQ?ID?NO：1所示，下游引物序列如SEQ?ID?NO：2所示，在上游引物中引入了BamHI位點，在下游引物中引入了EcoRI酶切位點，以合成cDNA第一鏈為模板，RT-PCR方法擴增目的基因片段。