[發(fā)明專利]檢測泡型包蟲病的免疫層析試條及制備方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210062778.6
• 申請日: 2012-03-12
• 公開（公告）號: CN102608330A
• 公開（公告）日: 2012-07-25
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 汪俊云;高春花;石鋒;楊玥濤;丁丹
• 申請（專利權(quán)）人: 中國疾病預(yù)防控制中心寄生蟲病預(yù)防控制所
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/558;C12N15/12;C12N15/63;C07K14/435
• 代理公司: 上海世貿(mào)專利代理有限責(zé)任公司 31128
• 代理人: 嚴(yán)新德

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物工程領(lǐng)域，尤其涉及一種免疫層析試條及制備方法，具體來說是一種檢測泡型包蟲病的免疫層析試條及制備方法。

背景技術(shù)

棘球蚴病(echinococcosis)又稱包蟲病(Hydatid?disease或Hydatidosis)，是由棘球?qū)俳{蟲的幼蟲寄生于人、畜體內(nèi)引起的一種人畜共患寄生蟲病，能感染人類的棘球?qū)俳{蟲有4種：細(xì)粒棘球絳蟲(Echinococcus?granulosus，Eg)、多房棘球絳蟲(Echinococcusmultilocularis，Em)、少節(jié)棘球絳蟲(E.oligarthrus)和伏氏棘球絳蟲(E.vogeli)。這4種棘球絳蟲的成蟲和幼蟲期形態(tài)不同，可引起不同類型的棘球蚴病。我國有兩種棘球蚴病即細(xì)粒棘球蚴病(cysticechinococ-cosis，CE)又稱囊型包蟲病，和多房棘球蚴病(alveolarechinococcosis，AE)又稱泡型包蟲病。

包蟲病是一個重要的世界性公共衛(wèi)生問題，廣泛流行于歐、亞、非和地中海區(qū)域沿岸國家，以及澳洲和南美。在我國，包蟲病主要流行于西部等12個省、自治區(qū)的牧區(qū)和農(nóng)牧區(qū)，其中新疆、青海、甘肅、寧夏、西藏、內(nèi)蒙和四川西部最為嚴(yán)重，是世界上包蟲病患病率最高的地區(qū)。此外，吉林、陜西、云南、貴州和河南等省局部地區(qū)也有小范圍流行。包蟲病流行區(qū)受威脅人口約7000萬。衛(wèi)生部《全國人體重要寄生蟲病現(xiàn)狀調(diào)查》報告顯示，這12省(區(qū))包蟲病患病率為1.084％，據(jù)此推算，目前流行區(qū)約有病人38萬人。由于B超診斷結(jié)果有一定的漏檢率，實際患病人數(shù)可能達(dá)60萬人以上。血清學(xué)檢查發(fā)現(xiàn)人群的感染率平均為11.98％，感染人數(shù)約為700萬人，受威脅人口約7000萬。

包蟲病需要手術(shù)或長期服藥治療，效果有限。其中囊型包蟲病包囊破裂可導(dǎo)致過敏休克而致患者死亡。泡型包蟲病被稱為“惡性包蟲病”是一種致死性寄生蟲病，10-15年的病死率高達(dá)90％以上。漏診的包蟲病患者失去治療時機而危及生命。包蟲病不但給患者帶來極大的痛苦和沉重的醫(yī)療負(fù)擔(dān)，且發(fā)病的高峰為20-50歲的青壯年，嚴(yán)重的患者失去勞動力，給社會帶來極大的壓力，系西部農(nóng)牧區(qū)群眾因病致貧，因病返貧的重要原因。此外，由于包蟲病在牛羊的感染率相當(dāng)高(可達(dá)90％)，每年因包蟲病也給我國畜產(chǎn)品造成的經(jīng)濟損失達(dá)數(shù)十億。因此包蟲病不但嚴(yán)重危害人民的生命健康，而且嚴(yán)重影響社會和經(jīng)濟發(fā)展、邊疆穩(wěn)定。

包蟲病的感染可長期(數(shù)年或十多年)無癥狀，一旦癥狀顯現(xiàn)，藥物治療效果差(因有兩層厚實的囊包裹使藥物難以進(jìn)入達(dá)到有效濃度)，而不得不進(jìn)行手術(shù)治療，甚至要反復(fù)進(jìn)行手術(shù)。因此，研究合適有效的免疫診斷技術(shù)用于早期診斷，以提高藥物治療效果，是最有效的降低發(fā)病率和死亡率的根本途徑，是包蟲病防治中亟待解決的問題。

目前對包蟲病的診斷極大地依賴影像學(xué)方法，如X光檢查、B型超聲診斷、CT掃描、核磁共振等物理診斷方法。但這些方法不能進(jìn)行早期診斷(影像學(xué)診斷出的包蟲病人已不太適合藥物治療)，且對有些囊腫、膿腫或腫塊不能進(jìn)行有效鑒別而誤診。由于影像檢查設(shè)備攜帶不便，加之昂貴，且對操作人員的技術(shù)要求較高，在疾病診斷與流行病學(xué)調(diào)查中(特別在邊遠(yuǎn)地區(qū)連電力供應(yīng)都受到限制)的應(yīng)用受到限制。

免疫學(xué)方法在包蟲病診斷上的應(yīng)用越來越受到重視，最有效的免疫學(xué)診斷方法是應(yīng)用純化天然抗原或重組抗原檢測包蟲病人特異抗體，常用檢測方法有間接血凝法(Indirect?haemagglutinationassay；IHA)、酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)、酶聯(lián)免疫電轉(zhuǎn)移印漬法(Enzyme-linked?immunoelectrotransfer?blot?assay；EITBA)，以及金標(biāo)免疫點印漬法(Gold-labelled?dotblotting；GDB；俗稱膜法或滲濾法)。但這些方法或費時費力、或需要冷鏈系統(tǒng)保存試劑、或?qū)x器設(shè)備及操作人員的要求較高而不適合現(xiàn)場使用。

在上述免疫方法中抗原的使用直接決定了檢測的敏感性和特異性。包蟲病免疫診斷抗原的研究經(jīng)歷了粗抗原、純化抗原和重組抗原三個階段。

細(xì)粒棘球蚴包囊液粗抗原(HCF)廣泛應(yīng)用于囊型包蟲病的診斷，其特點是檢測的敏感性較高，可達(dá)75％-95％，但易于其他疾病如囊蟲病等發(fā)生交叉反應(yīng)。針對這一問題許多學(xué)者采用不同的方法對囊液粗抗原進(jìn)行分離和純化，顯著提高了檢測的敏感性和特異性。