[發明專利]一種利用復合蛋白酶制備活性膠原蛋白的方法

無效

• 申請號: 201210062288.6
• 申請日: 2012-03-12
• 公開（公告）號: CN103305575A
• 公開（公告）日: 2013-09-18
• 發明（設計）人: 黃榮醒;郁帥陸;林琳
• 申請（專利權）人: 江蘇奧普萊醫療用品有限公司
• 主分類號: C12P21/06
• 分類號: C12P21/06
• 代理公司: 南京蘇高專利商標事務所(普通合伙) 32204
• 代理人: 徐激波

1.一種利用復合蛋白酶制備活性膠原蛋白的方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）向已經過預處理的魚皮中加入復合蛋白酶進行酶解；

（2）酶解完成后，抑制復合蛋白酶；

（3）將酶解液進行離心，取上清液；

（4）將上清液超濾濃縮再進行鹽析；

（5）再超濾脫鹽并濃縮，即得。

2.根據權利要求1所述的一種利用復合蛋白酶制備活性膠原蛋白的方法，其特征在于：步驟（1）中所述魚皮混合液濃度為2.0-8.0wt%，調節pH至2-6；所述的復合蛋白酶由木瓜蛋白酶、菠蘿蛋白酶、胰蛋白酶、中性蛋白酶、動物蛋白水解酶、酸性蛋白酶和胃蛋白酶中的任意兩種或兩種以上所組成；所述的酶解按照以下條件進行：復合蛋白酶的用量為魚皮混合液重量2.0-8.0wt%，酶解溫度是4-16℃，酶解時間6-10h，酶解反應體系的pH值控制在5.0-9.0。

3.根據權利要求1所述的一種利用復合蛋白酶制備活性膠原蛋白的方法，其特征在于：步驟（2）中所述的滅活復合蛋白酶的方法如下：向膠原蛋白酶解反應體系中加入抑制劑。

4.根據權利要求1所述的一種利用復合蛋白酶制備活性膠原蛋白的方法，其特征在于：步驟（3）中將酶解液按照以下方法離心，得到澄清透明的上清液：離心轉速為4000-5000r/min。

5.根據權利要求1所述的一種利用復合蛋白酶制備活性膠原蛋白的方法，其特征在于：步驟（4）中所述的超濾濃縮按照以下條件進行：操作壓力0.15-0.35MPa，溫度4-10℃，pH?2-6，超濾膜孔徑為10-50nm；所述的鹽析按照以下條件進行：膠原蛋白溶液濃度為2.5-5.5%，NaCl濃度為10-30%，pH值為2-6，溫度為4-10℃。

6.根據權利要求1所述的一種利用復合蛋白酶制備活性膠原蛋白的方法，其特征在于：步驟（5）中所述的超濾按照以下條件進行：操作壓力0.5-1.0Mpa，溫度為4-10℃，pH2-6，超濾膜孔徑為100-200nm。