[發明專利]菌種誘變儀以及利用其復合誘變放射形根瘤菌的方法

無效

• 申請號: 201210060546.7
• 申請日: 2012-03-09
• 公開（公告）號: CN102586102A
• 公開（公告）日: 2012-07-18
• 發明（設計）人: 張星昊
• 申請（專利權）人: 張星昊
• 主分類號: C12M1/42
• 分類號: C12M1/42;C12N13/00
• 代理公司: 石家莊匯科專利商標事務所 13115
• 代理人: 王琪

1.菌種誘變儀，包括箱體（2）、封裝于箱體（2）前部的箱門（3）、設置于箱體（2）外部的箱蓋（1）；電路部分包括電源、紫外燈管（D2）、紅外線燈（D3）、變壓器（T）、電感線圈（L）、滑動變阻器（R）以及顯示儀表；其特征在于紫外燈管（D2）、紅外線燈（D3）和變壓器初級線圈（L1）并聯后分別接于電源兩端，變壓器次級線圈（L2）經滑動變阻器（R）與電感線圈（L）構成回路，顯示儀表聯接于回路中；其中紫外燈管（D2）、紅外線燈（D3）設于箱體（2）內部上方，顯示儀表包括串聯設置于回路中的電流表（A），分別聯接于電感線圈（L）首尾兩端的電壓表（V）；電源選用220V交流電源，電感線圈（L）用直徑0.5毫米銅導線、纏繞匝數為1000，紫外燈管（D2）的波長為260nm，紅外線燈（D3）的功率為35W。

2.根據權利要求1所述的菌種誘變儀，其特征在于在箱體（2）內部上方還設一照明燈（D1），該照明燈（D1）與紫外燈管（D2）、紅外線燈（D3）、變壓器初級線圈（L1）并聯后接于電源兩端。

3.根據權利要求1所述的菌種誘變儀，其特征在于變壓器（T）、滑動變阻器（R）、電感線圈（L）、電源設于箱體（2）一側外部的箱蓋（1）內，電壓表（V）和電流表（A）設于箱蓋（1）表面。

4.根據權利要求1所述的菌種誘變儀，其特征在于電感線圈（L）選用鐵芯線圈。

5.根據權利要求1所述的菌種誘變儀，其特征在于滑動變阻器（R）的滑動端與位于箱蓋（1）表面的控制手柄（4）聯連。

6.一種利用如權利要求1-5所述的利用菌種誘變儀復合誘變放射形根瘤菌的方法，其特征在于由如下工藝步驟組成：

A、化學誘變

將放射形根瘤菌CGMCC?NO.5031試管菌種斜面接種于裝有滅菌后的150-200ml培養基的三角瓶中，進行搖床培養得到菌懸液，搖瓶培養的條件為：轉速200-220轉/分鐘，溫度36-38℃，培養時間20-24小時；

搖瓶培養基由如下質量百分數的組分組成：

葡萄糖0.5%-1%、蛋白肽0.1%-0.3%、磷酸氫二鉀0.15%-0.25%、磷酸二氫鉀0.05%-0.1%、生物素5ppm-10ppm、5-溴尿嘧啶0.005%-0.01%、利福平0.0005%-0.001%、余量為無菌水，pH=6-7；

B、磁光熱藥復合誘變

B1、培養平板的制備

將步驟A中制備的菌懸液稀釋后，取0.1-0.15ml均勻涂覆在盛有固體培養基的培養皿表面，固體培養基由如下質量百分數的組分組成：

葡萄糖0.5%-1%、花生餅粉0.1%-0.3%、蛋白胨0.1%-0.3%、磷酸氫二鉀0.08%-0.1%、磷酸二氫鉀0.02%-0.04%、生物素20ppm-30ppm、5-溴尿嘧啶0.005%-0.01%、利福平1ppm-1.5ppm、瓊脂1.5%-2.0%、余量為無菌水，pH=6-7；

B2、復合誘變

開啟磁光熱復合菌種誘變儀預熱，打開紅外線燈（D3）使箱體內溫度保持至36-38℃；打開紫外燈管（D2），然后調節滑動變阻器（R）旋鈕使電流表（A）指針指向0.6A，紫外照射30秒后關閉紫外燈管（D2）；72小時時，調節滑動變阻器（R）旋鈕使電流表（A）指針指向0刻度，關閉紅外線燈（D3）；將培養皿包扎嚴密后取出，倒置放置于培養箱中36-38℃培養86-96小時。

7.根據權利要求6所述的利用菌種誘變儀復合誘變放射形根瘤菌的方法，其特征在于所述的步驟B1中的菌懸液稀釋是將步驟A中制備的菌懸液稀釋為體積比為10^-10的菌懸液。

8.根據權利要求6所述的利用菌種誘變儀復合誘變放射形根瘤菌的方法，其特征在于所述的稀釋是按照體積比為1:10的比例依次將步驟A中制備的菌懸液稀釋為體積比為10^-10的菌懸液,即依次稀釋為10^-1、10^-2、10^-3、10^-4、10^-5、10^-6、10^-7、10^-8、10^-9、10^-10。

9.根據權利要求6所述的利用菌種誘變儀復合誘變放射形根瘤菌的方法，其特征在于所述的步驟B2中采用牛皮紙將培養皿包扎嚴密。