[發明專利]菌種誘變儀以及利用其復合誘變放射形根瘤菌的方法

無效

• 申請號: 201210060546.7
• 申請日: 2012-03-09
• 公開（公告）號: CN102586102A
• 公開（公告）日: 2012-07-18
• 發明（設計）人: 張星昊
• 申請（專利權）人: 張星昊
• 主分類號: C12M1/42
• 分類號: C12M1/42;C12N13/00
• 代理公司: 石家莊匯科專利商標事務所 13115
• 代理人: 王琪

技術領域

本發明屬于菌種誘變，特別是指一種菌種誘變儀以及利用其復合誘變放射形根瘤菌的方法。?

背景技術

微生物正常狀態下發生基因突變的機率為10^-6，發生正向突變的機率更低。采用單一的物理誘變方法對微生物突變產生的效應小，兩種或兩種以上的物理誘變方法復合使用對微生物突變產生的效應大。專利號為03218655.x的實用新型專利中公開了一種誘變接種兩用箱，該實用新型通過外接的磁力攪拌器對其內部的菌種實現單一物理方法的誘變，其強度不易實現調整和控制，且誘變效果不明顯。放射形根瘤菌CGMCC?NO.5031為中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏的菌種，申請號為201110219188.5的發明專利申請中公開可以利用該菌種生產可得然膠，但利用該菌種生產可得然膠發酵液中可得然膠的固含量較低。?

發明內容

本發明的目的之一在于提供一種菌種誘變儀，本發明的目的之二是提供利用菌種誘變儀復合誘變放射形根瘤菌CGMCC?NO.5031的方法，通過采用紫外燈光照、外加強度可調的磁場、使用紅外線燈提高菌種誘變環境溫度、以及利用藥物誘變對放射形根瘤菌CGMCC?NO.5031進行誘變，達到提高突變效應，提高突變后菌種的產膠率的目的。?

保藏編號為CGMCCNo.5031的放射形根瘤菌已于2011年7月12日由中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏，該保藏單位位于北京市朝陽區北辰西路1號院3號，該誘變株的分類命名為放射性根瘤菌(Rhizobium?radiobacter)。?

本發明的目的之一是這樣實現的：?

菌種誘變儀，包括箱體、封裝于箱體前部的箱門、設置于箱體外部的箱蓋；電路部分包括電源、紫外燈管、紅外線燈、變壓器、電感線圈、滑動變阻器以及顯示儀表，紫外燈管、紅外線燈和變壓器初級線圈并聯后分別接于電源兩端，變壓器次級線圈經滑動變阻器與電感線圈構成回路，顯示儀表聯接于回路中；其中紫外燈管、紅外線燈設于箱體內部上方；顯示儀表包括串聯設置于回路中的電流表，分別聯接于電感線圈首尾兩端的電壓表；電源選用220V交流電源，電感線圈用直徑0.5毫米銅導線、纏繞匝數為1000，紫外燈管的波長為260nm，紅外線燈的功率為35W。

本發明的第二個目的是這樣實現的：?

利用菌種誘變儀復合誘變放射形根瘤菌CGMCC?NO.5031的方法，由如下工藝步驟組成：

A、化學誘變

將放射形根瘤菌CGMCC?NO.5031試管菌種斜面接種于裝有滅菌后的150-200ml培養基的三角瓶中，進行搖床培養得到菌懸液，搖瓶培養的條件為：轉速200-220轉/分鐘，溫度36-38℃，培養時間20-24小時；

搖瓶培養基由如下質量百分數的組分組成：

葡萄糖0.5%-1%、蛋白肽0.1%-0.3%、磷酸氫二鉀0.15%-0.25%、磷酸二氫鉀0.05%-0.1%、生物素5ppm-10ppm、5-溴尿嘧啶0.005%-0.01%、利福平0.0005%-0.001%、余量為無菌水，pH=6-7；

B、磁光熱藥復合誘變

B1、培養平板的制備

將步驟A中制備的菌懸液稀釋后，取0.1-0.15ml均勻涂覆在盛有固體培養基的培養皿表面，固體培養基由如下質量百分數的組分組成：

葡萄糖0.5%-1%、花生餅粉0.1%-0.3%、蛋白胨0.1%-0.3%、磷酸氫二鉀0.08%-0.1%、磷酸二氫鉀0.02%-0.04%、生物素20ppm-30ppm、5-溴尿嘧啶0.005%-0.01%、利福平1ppm-1.5ppm、瓊脂1.5%-2.0%、余量為無菌水，pH=6-7；

B2、復合誘變

開啟菌種誘變儀預熱，打開紅外線燈D3使箱體內溫度保持至36-38℃；打開紫外燈管D2，然后調節滑動變阻器R旋鈕使電流表A指針指向0.6A，紫外照射30秒后關閉紫外燈管D2；72小時時，調節滑動變阻器R旋鈕使電流表A指針指向0刻度，關閉紅外線燈D3；將培養皿包扎嚴密后取出，倒置放置于培養箱中36-38℃培養86-96小時得到該菌種的誘變株。

申請人已于2012年3月6日將該誘變株提交中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏，該保藏單位位于北京市朝陽區北辰西路1號院3號，該誘變株的分類命名為放射性根瘤菌（Rhizobium??radiobacter），保藏編號為CGMCCNo.5848。?

本發明的具體技術構思還有：?