[發(fā)明專利]用于熒光定量檢測(cè)的一管式磁珠法病毒核酸的提取方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210058754.3
• 申請(qǐng)日: 2012-03-07
• 公開（公告）號(hào): CN102605102A
• 公開（公告）日: 2012-07-25
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 朱智芳;劉玉方;俞萍;李曉晨;孫克非
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 天根生化科技（北京）有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/70
• 分類號(hào): C12Q1/70;C12Q1/68;C12N15/10;C12R1/93
• 代理公司: 北京清亦華知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11201
• 代理人: 羅文群

1.一種用于熒光定量檢測(cè)的一管式磁珠法病毒核酸的提取方法，其特征在于該方法包括以下步驟：

(1)將10～50微升待測(cè)樣本加入到聯(lián)排管中，聯(lián)排管中含有：體積為待測(cè)樣本體積3倍的病毒裂解液以及10微升磁珠，混勻，使核酸釋放，磁珠與核酸結(jié)合，得到核酸和磁珠的混合物，其中所述的病毒裂解液的成分為：摩爾濃度為5～6摩爾/升的異硫氰酸胍、摩爾濃度為50～100毫摩爾/升的三羥甲基氨基甲烷-鹽酸緩沖液、摩爾濃度為1～10毫摩爾/升的乙二胺四乙酸二鈉、摩爾濃度為50～65毫摩爾/升的二硫蘇糖醇、25～30微克/毫升的糖原、體積比為1％的聚乙二醇辛基苯基醚、體積比為2％的非離子表明活性劑-NP40、體積比為0.5％的吐溫80；

(2)將上述含有核酸和磁珠混合物的聯(lián)排管置于磁力架上，通過磁力作用將吸附有核酸的磁性顆粒與溶液分開，棄掉溶液，取下聯(lián)排管；

(3)向上述步驟(2)的聯(lián)排管中加入100微升去蛋白緩沖液，充分混勻，在磁場(chǎng)作用下使磁性顆粒與液體分開，棄掉溶液，取下聯(lián)排管；

(4)向上述步驟(3)的聯(lián)排管中加入100微升去鹽漂洗液，充分混勻，在磁場(chǎng)作用下使磁性顆粒與液體分開，棄掉溶液，取下聯(lián)排管；

(5)將上述步驟(4)的聯(lián)排管置于室溫，晾干2分鐘，充分揮發(fā)管中殘余液體。