[發明專利]一種研究黃芩組織培養快速繁殖的方法

無效

• 申請號: 201210057290.4
• 申請日: 2012-03-07
• 公開（公告）號: CN102550422A
• 公開（公告）日: 2012-07-11
• 發明（設計）人: 徐根娣;于浩;吳俊燕
• 申請（專利權）人: 浙江師范大學
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種研究黃芩組織培養快速繁殖的方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：

對黃芩的種子進行處理，獲得接種外植體；

對外植體進行消毒處理；

對培養基配方進行篩選；

對黃芩的愈傷組織進行誘導；

篩選出最佳外植體和最佳激素組合。

2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述對黃芩的種子進行處理，獲得接種外植體的實現方法為：

將種子在光照培養箱中培養，白天溫度為25℃左右，光強2000～2500lx光照12小時，晚上為20℃左右，每天澆水一次，保持相對濕度70％～80％左右。

待黃芩種子發芽長出4～6片真葉時，取植株的根尖、莖及葉片作為接種的外植體。

3.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述對外植體進行消毒處理的實現方法為：

將黃芩幼苗從培養箱中取出，放入盆中，用自來水沖洗；

待泥沙沖洗干凈后取出，放入白瓷盤置于超凈工作臺上，取滅菌過的三角燒瓶將幼苗放入，用75％的酒精浸泡10s，棄酒精，用無菌水沖洗3次；

緊接著用0.1％升汞消毒10～12min；?

去升汞后再用無菌水沖洗5～6次，置于無菌的培養皿中，獲得無菌外植體進行接種。

4.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述對培養基配方進行篩選實現方法為：

經預實驗后選6個不同激素組合配方進行外植體接種；

在比較了愈傷組織誘導效果后，從以上6個不同激素組合配方中選出一個配方；

再進行梯度試驗確定出適宜黃芩愈傷組織誘導的最佳培養基配方。

5.如權利要求1或4所述的方法，其特征在于，所述6個不同激素組合配方如下：

配方1：MS+NAA?0.5mg/L+KT?0.5mg/L；

配方2：MS+NAA?1.0mg/L+2，4-D?1.0mg/L+6-BA?1.0mg/L；

配方3：MS+NAA?1.0mg/L+TDZ?1.0mg/L；

配方4：MS+NAA0.5mg/L+6-BA?0.5mg/L；

配方5：MS+IBA0.5mg/L+6-BA?0.5mg/L；

配方6：MS+IBA0.5mg/L+KT?0.5mg/L。

6.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述對黃芩的愈傷組織進行誘導的實現方法為：

選取黃芩無菌外植體，即取根、莖、葉各部分，分別將莖和根切成2cm左右長的小段，葉片切成0.5cm×0.5cm小塊，并在上劃上創傷口；

將處理好的材料分別接種在6個不同配方的培養基上，每個配方的培養基接種根、莖、葉各15瓶，每瓶接種外植體約6～8個；

誘導愈傷組織的條件為25℃培養箱中采用暗培養；

暗培養30天后，統計各處理的愈傷組織誘導率。

7.如權利要求1或6所述的方法，其特征在于，所述誘導率的計算方法為：?

誘導率％＝(形成愈傷組織外植體塊數/接種外植體塊數)×100。

8.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述篩選最佳激素組合的濃度的實現方法為：

將最適激素組合設置4個不同的濃度梯度進行試驗；

采用根、莖、葉中誘導率較高者做外植體，在以上4個不同濃度激素組合的培養基上接種；

暗培養30天后，統計并計算黃芩愈傷組織誘導率。

9.如權利要求1或8所述的方法，其特征在于，所述4個不同的濃度梯度如下：

1)MS+NAA?0.25mg/L+X?0.25mg/L；

2)MS+NAA?0.25mg/L+X?0.5mg/L；

3)MS+NAA0.5mg/L+X?1mg/L；

4)MS+NAA?0.25mg/L+X?1mg/L；

其中：X為6-BA、KT、TDZ中的一者。?