[發明專利]口蹄疫病毒VP1基因重組小反芻獸疫病毒活載體疫苗構建及應用在審
| 申請號： | 201210056072.9 | 申請日： | 2012-03-06 |
| 公開（公告）號： | CN102641499A | 公開（公告）日： | 2012-08-22 |
| 發明（設計）人： | 步志高;陳偉業;印春生 | 申請（專利權）人： | 中國農業科學院哈爾濱獸醫研究所;中國獸醫藥品監察所;哈爾濱維科生物技術開發公司 |
| 主分類號： | A61K39/155 | 分類號： | A61K39/155;A61K39/135;A61K48/00;A61P31/14;C12N15/86;C12R1/93 |
| 代理公司： | 北京市漢信律師事務所 11373 | 代理人： | 王文生 |
| 地址： | 150001 黑龍*** | 國省代碼： | 黑龍江;23 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 口蹄疫病毒 vp1 基因 重組 反芻 疫病 載體 疫苗 構建 應用 | ||
1.一種表達口蹄疫病毒VP1基因的重組小反芻獸疫病毒疫苗，優選所述口蹄疫病毒為Aisa?1型，更優選所述口蹄疫病毒VP1基因編碼的氨基酸序列如SEQ?ID?No.1所示。
2.根據權利要求1所述的重組小反芻獸疫病毒疫苗，其中所述口蹄疫病毒VP1基因的核苷酸序列如SEQ?ID?No.2所示。
3.根據權利要求1所述的重組小反芻獸疫病毒疫苗，其中用于表達口蹄疫病毒VP1基因的小反芻獸疫病毒疫苗是PPRV?Nigeria75/1(PPRV/N75/1)。
4.根據權利要求1-3中任何一項所述的重組小反芻獸疫病毒疫苗，其中所述口蹄疫病毒VP1基因位于所述小反芻獸疫病毒疫苗的編碼磷蛋白(P)的基因和編碼基質蛋白(M)的基因之間。
5.根據權利要求4所述的重組小反芻獸疫病毒疫苗，其為rPPRV/101VP1。
6.根據權利要求1-5中任何一項所述的重組小反芻獸疫病毒疫苗在制備預防小反芻獸疫和/或口蹄疫的疫苗中的應用。
7.一種生產根據權利要求1-5中任何一項所述的重組小反芻獸疫病毒疫苗的方法，該方法包括：
(1)構建轉錄質粒，該轉錄質粒包括其中插入口蹄疫病毒VP1基因的小反芻獸疫病毒疫苗的基因組全長cDNA序列；
(2)構建一個或多個轉錄輔助質粒，所述輔助質粒能夠分別表達所述小反芻獸疫病毒的核蛋白(N)、磷蛋白(P)、和多聚酶大蛋白(L)；
(3)將所述轉錄質粒和轉錄輔助質粒共轉染小反芻獸疫病毒疫苗復制許可的宿主細胞，培養轉染后的宿主細胞，優選所述小反芻獸疫病毒疫苗復制許可的宿主細胞是BHK細胞或Vero細胞；和
(4)從轉染細胞的細胞懸液中拯救重組小反芻獸疫病毒。
8.根據權利要求7所述的方法，其中所述轉錄質粒是pCI-PPRV/101VP1。
9.根據權利要求7或8所述的方法，其中所述轉錄輔助質粒分別是質粒pCI-N、pCI-P和pCI-L。
10.根據權利要求7-9中任何一項的方法制備的重組小反芻獸疫病毒疫苗，優選為rPPRV/101VP1。
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