[發明專利]一種同時檢測雞蛋中氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考及代謝物氟苯尼考胺殘留的方法

無效

• 申請號: 201210055590.9
• 申請日: 2012-03-05
• 公開（公告）號: CN102565269A
• 公開（公告）日: 2012-07-11
• 發明（設計）人: 謝愷舟;賈龍飛;張小杰;陳學森;謝星;張跟喜;孫瑛瑛;戴國俊;王金玉;陳國宏
• 申請（專利權）人: 揚州大學
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88;G01N30/06
• 代理公司: 南京知識律師事務所 32207
• 代理人: 盧亞麗

技術領域

本發明屬于獸藥殘留檢測領域，具體涉及一種同時檢測雞蛋中氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考及代謝物氟苯尼考胺殘留的方法。

背景技術

目前國內外報道關于動物源性食品中氯霉素類藥物的檢測方法，主要有薄層色譜法、氣相色譜法、高效液相色譜法、氣質聯用法、液質聯用法等，但到目前為止，同時檢測雞蛋中氯霉素(CAP)、甲砜霉素(TAP)、氟苯尼考(FF)和代謝物氟苯尼考胺(FFA)殘留的高效液相色譜-串聯質譜法(HPLC-MS/MS)的研究國內外尚未見報道。根據歐盟委員會2002/657/EC決議的規定，禁用獸藥的確證檢測方法必須能提供結構方面的信息，且要達到法規規定的4個確證分。氯霉素作為禁用獸藥，其陽性結果必須經過質譜確證。

發明內容

為了能同時檢測并確證氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考和代謝物氟苯尼考胺在雞蛋中的殘留，滿足歐盟標準，本發明提供了一種高效液相色譜-串聯質譜法，能同時檢測雞蛋中多種氯霉素類藥物的殘留。

本發明所采用的技術方案是：一種同時檢測雞蛋中氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考和代謝物氟苯尼考胺殘留的方法，是將雞蛋樣品經過提取、凈化后，以乙腈-水為流動相，采用高效液相色譜-串聯質譜法檢測。

液相色譜條件為：色譜柱，Eclipse?Plus?C₁₈，5μm，50mm×4.6mm?i.d.；保護柱，C₁₈柱，5μm；流動相，乙腈-水；流速：0.8mL·min^-1；柱溫：25℃；進樣體積：20μL。分離CAP、TAP、FF和FFA的梯度洗脫程序見表1。

表1?分離CAP、TAP、FF和FFA的梯度洗脫程序

質譜條件為：離子源，電噴霧離子源(ESI)；掃描方式，正離子掃描(FFA)和負離子掃描(CAP、TAP、FF和d₅-CAP)；檢測方式，多反應監測(MRM)；電噴霧毛細管電壓，4000V(正離子掃描)、3500V(負離子掃描)；干燥氣溫度：300℃；干燥氣流速，10L·min^-1；霧化器氣體壓力，15psi；鞘氣溫度，250℃；鞘氣流速，7L·min^-1；二級碰撞氣；氮氣。CAP、TAP、FF和FFA的保留時間和優化質譜條件見表2。

表2?CAP、TAP、FF和FFA的保留時間和優化質譜條件

注：*定量離子

本發明中雞蛋樣品中氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考和代謝物氟苯尼考胺的提取和凈化推薦使用堿性乙酸乙酯提取，用正己烷凈化。具體操作是：將雞蛋制成勻漿后，加入氘代氯霉素d₅-CAP內標溶液，然后加入30％乙腈溶液混勻，再用體積比49∶49∶2的乙酸乙酯∶乙腈∶氨水提取，提取液再經飽和正己烷脫脂，提取液重復去脂一次，最后用氮吹儀吹干。上機前殘渣用1.0mL?10％乙腈分兩次漩渦振蕩溶解，轉移至1.5mL離心管中；12100×g離心15分鐘，上清液經0.22μm濾膜過濾，濾液供HPLC-MS/MS測定。

附圖說明

圖1是雞蛋中CAP的基質添加標準曲線。

圖2是雞蛋中TAP的基質添加標準曲線。

圖3是雞蛋中FF的基質添加標準曲線。

圖4是雞蛋中FFA的基質添加標準曲線。

圖5是空白雞蛋樣品離子色譜圖。

圖6是基質添加標準品離子色譜圖。

圖7是添加雞蛋樣品離子色譜圖。

圖8CAP的子離子掃描圖。

圖9TAP的子離子掃描圖。

圖10FF的子離子掃描圖。

圖11FFA的子離子掃描圖。

圖12d₅-CAP的子離子掃描圖。

具體實施方式

在本發明中所使用的術語，除非有另外說明，一般具有本領域普通技術人員通常理解的含義。

下面結合具體實施例，并參照數據進一步詳細地描述本發明。應理解，這些實施例只是為了舉例說明本發明，而非以任何方式限制本發明的范圍。

在以下的實施例中，未詳細描述的各種過程和方法是本領域中公知的常規方法。所用試劑的來源、商品名以及有必要列出其組成成分者，均在首次出現時標明，其后所用相同試劑如無特殊說明，均以首次標明的內容相同。

本發明中所涉及到的溶液百分濃度，除特別說明外均為質量百分濃度。

1、實驗雞的飼養、給藥和樣品采集