[發明專利]一種從里氏木霉中分離多糖水解酶的方法

無效

• 申請號: 201210052751.9
• 申請日: 2012-03-02
• 公開（公告）號: CN103255117A
• 公開（公告）日: 2013-08-21
• 發明（設計）人: 劉愛驊;祁環;梁波;白罰利
• 申請（專利權）人: 中國科學院青島生物能源與過程研究所
• 主分類號: C12N9/42
• 分類號: C12N9/42
• 代理公司: 沈陽科苑專利商標代理有限公司 21002
• 代理人: 周秀梅;李穎

1.一種從里氏木霉中分離多糖水解酶的方法，其特征在于：將里氏木霉粗酶制劑溶解于20mM?Tris-HCl，pH7.0緩沖液中，以0.5M?NaCl在0.8-1.2mL/min的流速下，使用Mono?Q^TM5/50GL陰離子交換柱進行梯度分離，根據紫外吸收峰分別收集11.5-65.5min，70.5-75.7min，75.7-81.0min，81.0-102.5min對應的洗脫組份，即為多糖水解酶，并分別將上述收集組分進一步的純化，

將根據紫外吸收峰收集11.5-65.5min組分凍干后，溶于0.5-1mL超純水中，以0.9-1.1mL/min的流速，使用凝膠過濾柱Superdex?75pg層析，收集51.5-55.5min對應的洗脫組份，即為外切葡聚糖酶II(CBH?II)；收集58.5-63.5min對應的洗脫組份，即為內切葡聚糖酶II(EG?II)；

將根據紫外吸收峰收集70.5-75.7min組分凍干后，溶于0.5-1mL超純水中，以0.9-1.1mL/min的流速，使用凝膠過濾柱Superdex?75pg層析，收集47.5-51.0min對應的洗脫組份，即為木聚糖酶；收集53.0-61.5min對應的洗脫組份，即為內切葡聚糖酶I(EG?I)；

將根據紫外吸收峰收集75.7-81.0min凍干后，溶于0.5-1mL超純水中，以0.9-1.1mL/min的流速，使用凝膠過濾柱Superdex?200pg層析，收集68.5-74.5min對應的洗脫組份，即為β-木糖苷酶；收集77.0-82.5min對應的洗脫組份，即為β-葡萄糖苷酶(BGL)；

將根據紫外吸收峰收集81.0-102.5min凍干后，溶于0.5-1mL超純水中，以0.9-1.1mL/min的流速，使用凝膠過濾柱Superdex?75pg層析，收集52.5-62.5min對應的洗脫組份，即為外切葡聚糖酶I(CBH?I)。

2.按權利要求1所述的從里氏木霉中分離多糖水解酶的方法，其特征在于：將所述Mono?Q^TM5/50GL陰離子交換柱以0.8-1.2mL/min的流速，使用20mM?Tris-HCl，pH7.0緩沖液預平衡，待用。

3.按權利要求1所述的從里氏木霉中分離多糖水解酶的方法，其特征在于：將所述凝膠過濾柱Superdex?75pg和凝膠過濾柱Superdex?200pg，以0.9-1.1mL/min的流速，使用TBS預平衡，待用。

4.按權利要求3所述的從里氏木霉中分離多糖水解酶的方法，其特征在于：所述TBS為50mM?Tris-HCl?pH?7.5，150mM?NaCl。

5.按權利要求1所述的從里氏木霉中分離多糖水解酶的方法，其特征在于：所述將里氏木霉粗酶制劑為將里氏木霉培養于以1％水葫蘆為唯一碳源的培養基中，而后采用飽和硫酸銨沉淀收集20％-60％飽和度得到沉淀，待用。

6.按權利要求5所述的從里氏木霉中分離多糖水解酶的方法，其特征在于：所述1％水葫蘆為唯一碳源的培養基成分：Mandel培養基中添加1％的水葫蘆作為唯一碳源。