[發明專利]利用SCAR標記鑒定甘蔗抗黑穗病性方法

無效

• 申請號: 201210051544.1
• 申請日: 2012-03-02
• 公開（公告）號: CN102586440A
• 公開（公告）日: 2012-07-18
• 發明（設計）人: 闕友雄;許莉萍;徐景升;陳如凱
• 申請（專利權）人: 福建農林大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 福州元創專利商標代理有限公司 35100
• 代理人: 蔡學俊

技術領域

本發明涉及一種植物的抗病性分子標記的鑒定方法，具體涉及利用SCAR標記鑒定甘蔗抗黑穗病性方法，屬于生物技術領域。

背景技術

甘蔗（Saccharum?officinarum）是最主要的糖料作物，蔗糖占我國食糖總產的90%以上，甘蔗生產關系我國食糖安全。由黑粉菌Ustilago?scitaminean引起的甘蔗黑穗病是一種世界性的也是我國最嚴重的甘蔗真菌性病害，目前主栽品種宿根黑穗病發病率高達20%，造成嚴重損失，培育抗病品種是最經濟、最有效的控制措施，抗病性鑒定的效率和準確性直接影響抗病育種的進程和效果。

目前，國內外甘蔗對黑穗病抗性鑒定還是采用用人工接種蔗莖后田間種植，在整個生長季觀察發病率進行抗病性鑒定，其不足在于：首先至少需要根據兩個作物季（即2次新植或1次新植和1次宿根）的鑒定結果進行綜合判斷，周期長達2年；其次該方法工作量大，占地大，成本高，難以對大規模的樣品進行鑒定，而甘蔗高度雜合的異源多倍體作物，也是無性繁殖作物，雜交F₁代分離群體性狀高度分離，是進行選擇的最佳時期，但優良聚合基因型重組概率很低，通常從實生苗到育成品種的概率約為1/100,000，故鑒定和選擇的工作量極大。甘蔗抗黑穗病性狀的選擇也是以雜交分離的大群體作為選擇基礎，現有的鑒定方法與育種的大群體要求不相適應；再次田間抗病性表現是甘蔗基因型、環境和病原3個因素互作的結果，因此，環境對抗病性表現型影響大，不同年份間的鑒定結果有比較大的差異。

因此，甘蔗對黑穗病抗性的鑒定效率和準確性直接關系甘蔗生產的安全，而目前的抗病性鑒定方法效率低、周期長、耗費高，準確性也不足，需要更簡便、快速、準確的抗病性鑒定技術。

發明內容

本發明的目的是提供一種利用SCAR標記鑒定甘蔗抗黑穗病性的方法。

????本發明利用SCAR標記鑒定甘蔗抗黑穗病性的方法，包括基因組DNA的提取、SCAR-PCR標記的檢測體系建立和SCAR-PCR產物的檢測，其特征在于：

1、??????????????SCAR-PCR標記的檢測：使用的檢測引物是甘蔗SCAR-F和SCAR-R，其中，SCAR-F

是5′-CTTTGTTTCCCGTAGTGTCTTGT-3′，SCAR-R是5'-ATAGCCTGCCTTCTCTCCTTT-3'；???

2、SCAR-PCR標記的檢測建立：SCAR-PCR擴增體系為總體積25?μl，內含2.5?μl?10×PCR緩沖液，2.5?μl?25?mmol/L?MgCl₂，0.5?μl?10?mmol/L?dNTP，10?mmol/L?的檢測引物SCAR-F和SCAR-R各1.0?μl，1.25?U?Taq?DNA?Polymerase，20-50?ng基因組DNA，ddH₂O補足到25?μl；SCAR-PCR擴增程序如下：94?℃?4?min；94?℃?1?min，58?℃?1?min，72?℃?2?min，30個循環；72?℃10?min；所述10×PCR緩沖液組成成分為100?mmol/L?pH8.5?Tris-HCl，500?mmol/L?KCl和15?mmol/L?MgCl₂；

3、SCAR-PCR產物的檢測：電泳檢測的SCAR-PCR擴增圖譜中，在分子量為331?bp的位置出現DNA條帶，為甘蔗感黑穗病的標志；在分子量為331?bp的位置未出現DNA條帶，為甘蔗抗黑穗病標志。

本發明具有以下優點：本發明的利用SCAR標記鑒定甘蔗抗黑穗病性的方法，具有靈敏度高，所需要的DNA用量少的特點；與常規的人工接種田間抗性鑒定相比，具有操作簡便、檢測時間短、準確性高、容易判斷、重復性好和不受環境條件影響等優點。

1、操作簡便：該檢測方法得到的顯性標記可顯著減少甘蔗抗黑穗病性鑒定的工作量，檢測時只需要SCAR-PCR擴增和產物檢測即可快速鑒定甘蔗抗黑穗病性；而常規的人工接種田間抗性鑒定則需要大量的人力和物力來開展人工接種和田間收據收集處理，當品種多時鑒定工作難以進行。

2、檢測時間短：該檢測方法所需時間為1-2天，而常規的人工接種田間抗性鑒定試驗所需時間至少為2年。