[發(fā)明專利]吉他霉素殘留檢測用單克隆抗體及制備方法和應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210049826.8
• 申請日: 2012-02-29
• 公開（公告）號: CN103288963A
• 公開（公告）日: 2013-09-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 袁宗輝;王小清;彭大鵬;王玉蓮;黃玲利;陳冬梅;陶燕飛;戴夢紅;劉振利
• 申請（專利權(quán)）人: 華中農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號: C07K16/44
• 分類號: C07K16/44;G01N33/577
• 代理公司: 武漢宇晨專利事務(wù)所 42001
• 代理人: 王敏鋒

1.一種吉他霉素殘留檢測用單克隆抗體，其特征在于，雜交瘤細(xì)胞KA/2A9，CCTCC，NO：C201184。

2.權(quán)利要求1所述的一種吉他霉素殘留檢測用單克隆抗體的制備方法，其步驟是：

A、將半抗原吉他霉素與牛血清白蛋白偶聯(lián)得到免疫原；

B、將半抗原吉他霉素與卵清蛋白偶聯(lián)得到包被原kitasamycin-AOAA-OVA；

C、利用步驟A的免疫原制備得到雜交瘤細(xì)胞株KA/2A9所分泌的單克隆抗體；

D、用步驟B的包被原包被固相載體；

E、將待測樣品用偏磷酸/乙醇下提取、乙酸乙酯反萃取，氮?dú)獯蹈伞悠废♂屢褐匦氯芙獾玫酱郎y物；

F、對步驟E的待測物進(jìn)行酶聯(lián)免疫檢測；

所述的步驟E樣品稀釋液的組分及配比為：NaCl?8.00g，KH₂PO4?0.20g，Na₂HPO4·12H₂O2.90g，KCl?0.20g，加雙蒸水定容至1000mL。

3.權(quán)利要求1所述的一種吉他霉素殘留檢測的試劑盒，它包括：

(1)包被有包被原kitasamycin-AOAA-OVA的酶標(biāo)板；

(2)吉他霉素標(biāo)準(zhǔn)品溶液6瓶，濃度分別為0、1.25、2.5、5、10、20μg/L；

(3)KA/2A9單克隆抗體工作液；

(4)辣根過氧化物酶標(biāo)記的羊抗鼠IgG抗體工作液；

(5)濃縮磷酸鹽緩沖液：NaCl?80.00g，KH2PO4?2.00g，Na2HPO4·12H2O?29.00g，KCl2.00g，加雙蒸水至1000mL；

(6)濃縮洗滌液：NaCl?80.00g，KH2PO4?2.00g，Na2HPO4·12H2O?29.00g，KCl?2.00g，Tween?20?5mL，加雙蒸水至1000mL；

(7)底物混合液；

(8)終止液：2mol/L硫酸溶液。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種吉他霉素殘留檢測的試劑盒，其特征在于：所述的一種酶標(biāo)板制備的制備方法，其步驟是：

1)包被：用碳酸鹽緩沖液將kitasamycin-AOAA-OVA稀釋成8μg/mL包被原溶液，吸取100μL包被原溶液于各酶標(biāo)孔，水平放置于濕盒，4℃孵育12h；

2)洗板：甩出酶標(biāo)板內(nèi)包被原溶液，拍干，吸取250μL洗滌液于各酶標(biāo)孔，靜置30s后，甩出洗滌液，在吸水紙上拍干，重復(fù)洗滌3次；

3)封閉：準(zhǔn)確吸取250μL封閉液于各酶標(biāo)孔，水平置于濕盒內(nèi)，37℃培養(yǎng)箱孵育2h；

4)洗板：甩出封閉液，準(zhǔn)確吸取250μL洗滌液于各酶標(biāo)孔，靜置30s后，甩出洗滌液，在吸水紙上拍干；重復(fù)洗滌3次；

5)烘干：在吸水紙上拍干后，將酶標(biāo)板于37℃培養(yǎng)箱中倒置烘干0.5h；

6)封裝：酶標(biāo)板烘干后和干燥劑一起裝入鋁箔袋，用真空封裝機(jī)封裝；所述的干燥劑為硅膠、無水氯化鈣。

5.權(quán)利要求3所述的一種吉他霉素殘留檢測的試劑盒在動物源性食品中吉他霉素殘留檢測中的應(yīng)用。