[發明專利]吉他霉素殘留檢測用單克隆抗體及制備方法和應用有效

申請號：	201210049826.8	申請日：	2012-02-29
公開（公告）號：	CN103288963A	公開（公告）日：	2013-09-11
發明（設計）人：	袁宗輝;王小清;彭大鵬;王玉蓮;黃玲利;陳冬梅;陶燕飛;戴夢紅;劉振利	申請（專利權）人：	華中農業大學
主分類號：	C07K16/44	分類號：	C07K16/44;G01N33/577
代理公司：	武漢宇晨專利事務所 42001	代理人：	王敏鋒
地址：	430070 湖***	國省代碼：	湖北;42
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摘要：
搜索關鍵詞：	吉他霉素殘留檢測單克隆抗體制備方法應用
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【說明書】：

技術領域

本發明屬于獸藥殘留分析和免疫學技術領域，具體涉及一種吉他霉素殘留檢測用單克隆抗體，同時還涉及一種吉他霉素殘留檢測用單克隆抗體的制備方法，還涉及一種吉他霉素殘留檢測用單克隆抗體的用途。?

背景技術

吉他霉素屬于大環內酯類抗生素，廣泛用于豬和禽的生產。不正確的使用會導致其在動物體內的殘留，導致消費者+使用后出現一系列不良反應。主要有輕微的胃腸道反應如腹瀉、惡心、嘔吐、過敏、肝毒性、耳鳴、聽覺障礙和心臟毒性等(舒剛等，2006)。吉他霉素殘留還會引起人體內細菌產生耐藥性，直接影響人類疾病治療(Deguchi?et?al.，1990；劉秀昌和趙學良，2009)。Nakae等在臨床樣本細菌耐藥性實驗中證實，臨床細菌吉他霉素耐藥很嚴重，97.6～100％臨床分離菌株對其耐藥(Nakae?et?al.，1999)。?

考慮到吉他霉素的危害，我國規定其在豬和雞各組織的殘留限量均為200μg/kg(中華人民共和國農業部公告第235號，2002)。各種吉他霉素制劑在豬和雞的休藥期均為7d，產蛋雞禁用(中華人民共和國農業部公告第278號，2003)。日本肯定列表制度規定吉他霉素在豬、雞各組織的最高殘留限量均為200μg/kg(日本肯定列表，2006)。?

現有的吉他霉素檢測方法主要是高效液相色譜方法和高效液相色譜方法與質譜聯用方法(He?et?al.，2009；Gonzalez?Huebra?MJ?et?al.，2005，2007；Horie?et?al.，1998，2003)。儀器檢測方法測定結果準確，而且能夠對殘留物質進行定性分析，是殘留檢測的確證方法。但儀器方法樣品處理一般比較復雜、耗時長、所用儀器成本高，很難在基層普及。ELISA檢測方法具有簡便、快速、低成本和高通量的特點，適合樣品的廣泛篩選。目前尚未檢索到關于吉他霉素特異性抗原、抗體、酶聯免疫方法和試劑盒的報道。制備吉他霉素的單克隆抗體、建立ELISA檢測方法和試劑盒，有利于監控吉他霉素的殘留。?

發明內容

本發明的目的是在于提供了一種吉他霉素殘留檢測用單克隆抗體，該抗體是首次制備的能特異性識別吉他霉素的單克隆抗體。?

本發明的另一個目的是在于提供了一種吉他霉素殘留檢測用單克隆抗體的制備方法，該方法是由半抗原吉他霉素與牛血清白蛋白偶聯制備的免疫原免疫小鼠，經細胞融合與克隆篩?選后，獲得了能特異性分泌吉他霉素單克隆抗體的雜交瘤細胞株KA/2A9，CCTCCNO：C201184。?

本發明的再一個目的是在于提供了一種吉他霉素殘留檢測的試劑盒，該試劑盒能廣泛應用于動物可食性組織中吉他霉素的殘留檢測，準確提供動物可食性組織中吉他霉素的殘留量信息?

本發明的再有一個目的是在于提供了一種吉他霉素殘留檢測試劑盒在動物源性食品中吉他霉素殘留檢測中的應用。為動物源性食品中吉他霉素的殘留監控提供了可靠地技術手段。?

為了實現上述的目的，本發明采用以下技術措施：?

一種能識別吉他霉素的單克隆抗體，其特征在于，雜交瘤細胞株KA/2A9，CCTCC，NO：C201184。?

上述雜交瘤細胞KA/2A9，保藏在位于中國武漢武漢大學內的中國典型培養物保藏中心(CCTCC)，其保藏號為CCTCC?NO：C201184。?

所用的免疫原是由半抗原吉他霉素與牛血清白蛋白偶聯制備的。?

進一步，本發明提出了一種適用于吉他霉素殘留檢測的酶聯免疫(ELISA)方法，該方法包括免疫原、包被原和抗體的制備以及樣品的前處理等步驟，一種吉他霉素殘留檢測用單克隆抗體的制備方法，其步驟是：?

A、將半抗原吉他霉素與牛血清白蛋白偶聯得到免疫原；?

B、將半抗原吉他霉素與卵清蛋白偶聯得到包被原；?