[發明專利]巫山淫羊藿的組培快繁方法和繁育的巫山淫羊藿

有效

• 申請號: 201210045451.8
• 申請日: 2012-02-27
• 公開（公告）號: CN102577959A
• 公開（公告）日: 2012-07-18
• 發明（設計）人: 郭巧生;周海琴;朱國勝;周寧;劉作易;賀勇;楊相波
• 申請（專利權）人: 貴州同濟堂制藥有限公司
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 北京弘權知識產權代理事務所(普通合伙) 11363
• 代理人: 晏四平;王磊

技術領域

本發明屬中藥材栽培技術領域，涉及巫山淫羊藿繁育方法，特別涉及巫山淫羊藿的組培快繁方法。

背景技術

巫山淫羊藿Epimedium?wushanense?T.S.Ying為小檗科淫羊藿屬多年生宿根性草本藥用植物，為《中華人民共和國藥典》2010年版一部所載品種。以其干燥的葉入藥，有補腎陽，強筋骨，祛風濕的功效，且具有改善心血管系統，調節內分泌和抗骨質疏松等生理活性。巫山淫羊藿藥材原料主要依靠野生資源，隨著國內外對其需求量的不斷增大，巫山淫羊藿野生資源遭到嚴重破壞，不能滿足國內外市場的需求。目前淫羊藿的繁殖方式主要有：通過地下根莖的無性繁殖及種子繁殖(有性繁殖)，淫羊藿種子存在明顯的休眠現象，繁殖發芽率低，且生長緩慢，生產上大多采用分株繁殖。

人們期待有一種能夠以低成本、高繁殖率、和/或繁殖周期短的方法來繁育和栽培巫山淫羊藿，以滿足越來越大的巫山淫羊藿藥用需求，并保護野生藥用資源。

發明內容

本發明的目的是提供一種能夠以低成本、高繁殖率、和/或繁殖周期短的方法來繁育和栽培巫山淫羊藿。本發明人發現以巫山淫羊藿種子為繁育材料，使用特定的培養條件，可以有利地實現上述有關巫山淫羊藿繁育中的一個或多個方面的要求。本發明基于此發現而得以完成。

為此，本發明第一方面涉及一種巫山淫羊藿的組培快繁方法，包括以下步驟：

A.外植體層積處理：將巫山淫羊藿種子消毒后于0～10℃低溫沙藏層積處理；

B.外植體消毒：將層積處理后的種子進行消毒處理，再用無菌鑷子將種胚剝出，備用；

C.初代誘導：將消毒后的種胚接種于誘導培養基中培養，使種胚誘導愈傷組織而分化出不定芽，或者使種胚直接誘導出芽；

D.繼代增殖：將步驟C中所得芽轉入增殖培養基中，生成組培叢芽；

E.再生植株誘導生根：將步驟D誘導分化的1～4cm長的健康的芽叢長成的小植株轉入生根培養基中，培養以形成白色須根，進而形成完整植株。

根據本發明第一方面的方法，其中步驟A中，所述消毒是如下方式處理：將種子用流水沖洗，于酒精中浸泡，再在HgCl₂中浸泡，再用無菌水沖洗。在一個實施方案中，步驟A中，所述消毒是如下方式處理：流水沖洗15-30min(例如約30min)，于45-75％(例如約75％)酒精中浸泡10-60s(例如約30s)，再在0.1-0.5％(例如約0.5％)的HgCl₂中浸泡2-8min(例如約6min)，無菌水沖洗2-6次(例如約5次)。

根據本發明第一方面的方法，其中步驟A中，所述低溫沙藏層積處理是如下方式處理：使種子與河沙按1∶2～5的比例混合，保持含水量50～70％，經3～8℃低溫沙藏層積處理75～120天。由此處理的種子可以打破種子的休眠。在一個實施方案中，所述河沙是經高溫滅菌1-5h(例如約2h)后再冷卻至室溫的河沙。在一個實施方案中，所述種子與河沙按1∶(1-5)，例如約1∶3的比例混合。在一個實施方案中，所述種子與河沙按1∶3的比例混合，保持含水量40-70％(例如約60％)。在一個實施方案中，所述種子與河沙按1∶3的比例混合，保持含水量60％，經2-5℃低溫沙藏層積處理60-100天(例如約90天)。

根據本發明第一方面的方法，其中步驟B中，所述消毒是先用酒精消毒，接著用HgCl₂消毒。在一個實施方案中，步驟B中，將層積處理結束后的種子洗去河沙，于45-75％(例如約75％)酒精中浸泡10-60s(例如約30s)，無菌水沖洗2-6次(例如約5次)，再用0.1-0.5％(例如約0.5％)的HgCl₂消毒2-8min(例如約6min)，無菌水沖洗2-6次(例如約5次)。在一個實施方案中，步驟B中，用灼燒冷卻后的鑷子和解剖刀將種胚輕輕剝出，無菌濾紙吸干水分后，備用于下一處理步驟。