[發(fā)明專利]巫山淫羊藿的組培快繁方法和繁育的巫山淫羊藿

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210045451.8
• 申請日: 2012-02-27
• 公開（公告）號: CN102577959A
• 公開（公告）日: 2012-07-18
• 發(fā)明（設計）人: 郭巧生;周海琴;朱國勝;周寧;劉作易;賀勇;楊相波
• 申請（專利權）人: 貴州同濟堂制藥有限公司
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 北京弘權知識產權代理事務所(普通合伙) 11363
• 代理人: 晏四平;王磊

1.巫山淫羊藿的組培快繁方法，包括以下步驟：

A.外植體層積處理：將巫山淫羊藿種子消毒后于0～10℃低溫沙藏層積處理；

B.外植體消毒：將層積處理后的種子進行消毒處理，再用無菌鑷子將種胚剝出，備用；

C.初代誘導：將消毒后的種胚接種于誘導培養(yǎng)基中培養(yǎng)，使種胚誘導愈傷組織而分化出不定芽，或者使種胚直接誘導出芽；

D.繼代增殖：將步驟C中所得芽轉入增殖培養(yǎng)基中，生成組培叢芽；

E.再生植株誘導生根：將步驟D誘導分化的1～4cm長的健康的芽叢長成的小植株轉入生根培養(yǎng)基中，培養(yǎng)以形成白色須根，進而形成完整植株。

2.根據權利要求1的方法，其中步驟A中，所述消毒是如下方式處理：流水沖洗15-30min，于45-75％酒精中浸泡30s，再在0.1％-0.5％HgCl₂中浸泡2-8min，無菌水沖洗2-6次。

3.根據權利要求1的方法，其中步驟A中，所述低溫沙藏層積處理是如下方式處理：使種子與河沙按1∶2～5的比例混合，保持含水量50～70％，經3～8℃低溫沙藏層積處理75～120天。

4.根據權利要求1的方法，其中步驟B中，所述消毒是先用酒精消毒，接著用HgCl₂消毒。

5.根據權利要求1的方法，其特征在于：

步驟C中，所述誘導培養(yǎng)基是包含MS+2，4-D?2mg/L+IBA?2mg/L+NAA?0.5mg/L+蔗糖30g/L+0.6％瓊脂的培養(yǎng)基，或者是包含MS+6-BA?1mg/L+NAA?0.5mg/L+IBA?1mg/L+蔗糖30g/L+0.6％瓊脂的培養(yǎng)基，或者是包含MS+IBA?2mg/L+6-BA?0.5mg/L+蔗糖30g/L+0.6％瓊脂的培養(yǎng)基；

步驟D中，所述增殖培養(yǎng)基是包含MS+6-BA?1.0mg/L+NAA?0.5mg/L+蔗糖30g/L+0.6％瓊脂的培養(yǎng)基；和/或

步驟E中，所述生根培養(yǎng)基是包含1/2MS+0.1NAAmg/L的培養(yǎng)基。

6.根據權利要求1的方法，其中步驟C中，初代誘導是如下處理的：將消毒后的種胚接種于包含MS+2，4-D?2mg/L+IBA?2mg/L+NAA?0.5mg/L+蔗糖30g/L+0.6％瓊脂的誘導培養(yǎng)基中培養(yǎng)，產生愈傷組織，接著在包含MS+6-BA?1mg/L+NAA?0.5mg/L+IBA1mg/L+蔗糖30g/L+0.6％瓊脂的誘導培養(yǎng)基中培養(yǎng)，分化出不定芽；或者，將消毒后的種胚接種于包含MS+IBA?2mg/L+6-BA?0.5mg/L+蔗糖30g/L+0.6％瓊脂的誘導培養(yǎng)基中培養(yǎng)，直接誘導出芽。

7.根據權利要求1至6任一項所述的方法，其包括以下步驟：

A.外植體層積處理：將巫山淫羊藿種子，流水沖洗，消毒后于0～10℃低溫沙藏層積處理；

B.外植體消毒：將層積處理后的種子，先用酒精浸泡，再用升汞浸泡，無菌水沖洗干凈，用無菌鑷子將種胚剝出，備用；

C.初代誘導：將消毒后的種胚接種于包含MS+2，4-D?2mg/L+IBA?2mg/L+NAA0.5mg/L+蔗糖30g/L+0.6％瓊脂的誘導培養(yǎng)基中培養(yǎng)，產生愈傷組織，接著在包含MS+6-BA?1mg/L+NAA?0.5mg/L+IBA?1mg/L+蔗糖30g/L+0.6％瓊脂的誘導培養(yǎng)基中培養(yǎng)，分化出不定芽；或者，將消毒后的種胚接種于包含MS+IBA?2mg/L+6-BA?0.5mg/L+蔗糖30g/L+0.6％瓊脂的誘導培養(yǎng)基中培養(yǎng)，直接誘導出芽；

D.繼代增殖：將步驟C中所得芽轉入包含MS+6-BA?1.0mg/L+NAA?0.5mg/L+蔗糖30g/L+0.6％瓊脂的增殖培養(yǎng)基中，生成組培叢芽；

E.再生植株誘導生根：將誘導分化的1～4cm長的健康的芽叢長成的小植株轉入生根培養(yǎng)基中，1個月后形成白色須根，進而形成完整植株。

8.一種巫山淫羊藿株植，其是由權利要求1至7任一項所述的方法繁殖得到的。

9.一種巫山淫羊藿的芽，其是由權利要求1至7任一項所述的方法繁殖得到的。

10.一種巫山淫羊藿的愈傷組織，其是由權利要求1至7任一項所述的方法繁殖得到的。