[發明專利]抑制發芽/生根的大麥成熟胚組織培養法及所用培養基

有效

• 申請號: 201210044472.8
• 申請日: 2012-02-26
• 公開（公告）號: CN102533633A
• 公開（公告）日: 2012-07-04
• 發明（設計）人: 華為;楊建明;汪軍妹;朱靖環;賈巧君;尚毅;林峰;顧玉坤
• 申請（專利權）人: 浙江省農業科學院
• 主分類號: C12N5/04
• 分類號: C12N5/04;A01H4/00
• 代理公司: 杭州中成專利事務所有限公司 33212
• 代理人: 金祺

技術領域

本發明屬于植物組織培養領域，具體涉及一種有效抑制發芽的大麥成熟胚組織培養方法及相應的組織培養體系。

背景技術

大麥組織培養不僅是大麥品種改良的有效途徑，也是進行大麥遺傳轉化的重要環節。目前，大麥組織培養成功的外植體包括頂端分生組織、花藥、幼胚和成熟胚等。其中，幼胚被認為是最理想的外植體材料，愈傷誘導率和植株再生率都比較高，獲得轉基因大麥的報道基本以幼胚為受體。而大麥幼胚取材受時間、空間和季節等的限制，合適的取材時期難以把握，在一定程度上制約了轉基因大麥的有效開展與應用。

大麥成熟胚取材方便，不受季節限制，數量也能保證，是開展大麥遺傳轉化最為方便實用的受體。但是，由于受各種因素的影響，大麥成熟胚組織培養植株再生率目前還非常低。1984年，Lupotto(Annals?of?Botany，54：523-529)首次報道使用大麥種子完整的成熟胚誘導愈傷組織，并獲得了再生植株，但再生率很低，只獲得了2株再生苗。郭曉琳等(2005，植物遺傳資源學報，6(4)：418-422)將大麥種子沿腹溝縱切，切面朝下接種到培養基上，愈傷誘導率達到70％，綠苗分化率(分化的綠苗數/接種的愈傷數)在20％左右。He和Jia(2008，Plant?Cell?Tiss?Organ?Cult，95：251-254)使用胚乳支持的方法誘導裸大麥的成熟胚，在一定程度上提高了愈傷誘導率和分化率。Han等(2011，J?Zhejiang?Univ-Sci?B，12(5)：399-407)使用二等分縱切的方法，將切下的成熟胚接種到培養基上，愈傷誘導率達80％左右，綠苗分化率15％左右。然而這些方法都存在離體胚發芽的現象，嚴重抑制了初代愈傷組織的形成，是造成成熟胚組織培養效率低的主要原因之一。另外大麥穎果被穎殼緊密包被(裸大麥除外)，腹溝部分難以完整去殼，表面消毒效果差，所以上述方法中大多存在誘導過程極易污染的現象，顯著降低了組培效率。

發明內容

本發明要解決的技術問題是提供一種有效抑制發芽/生根的大麥成熟胚組織培養方法及所用培養基，采用該方法能解決目前大麥離體成熟胚培養極易出芽/長根、抑制愈傷組織生長的現象和組織培養污染率高，綠苗分化率低等問題，使用該方法能獲得較高的綠苗分化率。

為了解決上述技術問題，本發明提供一種大麥成熟胚離體培養基，包括誘導愈傷培養基、分化培養基和生根壯苗培養基；

誘導愈傷培養基的制備方法如下：

每升誘導基液先調節pH為5.7～5.9，然后加入3.8～4.2g的植物凝膠(Phytagel)；接著進行高溫、高壓的滅菌處理(為常規的滅菌處理方式，下同)，最后加入過濾滅菌(例如采用0.2μm微孔膜過濾滅菌，下同)，處理后的維生素B₁(VB₁)9～11mg、維生素B₆(VB₆)0.9～1.1mg和煙酸0.9～1.1mg；

誘導基液由以下含量的組分組成：