[發明專利]一種腈水解酶及其基因和應用

有效

• 申請號: 201210044367.4
• 申請日: 2012-02-24
• 公開（公告）號: CN102533705A
• 公開（公告）日: 2012-07-04
• 發明（設計）人: 許建和;張陳勝;潘江;李春秀;張志鈞
• 申請（專利權）人: 華東理工大學
• 主分類號: C12N9/78
• 分類號: C12N9/78;C12N15/55;C12N15/63;C12N1/21;C12N15/70;C12P7/42;C12R1/19;C12R1/01
• 代理公司: 上海智信專利代理有限公司 31002
• 代理人: 朱水平;沈利

1.一種腈水解酶，其特征在于，該腈水解酶是如下(a)或(b)的蛋白質；

(a)其氨基酸序列如序列表中SEQ?ID?No.2所示；

(b)在(a)的基礎上經過取代、缺失或添加一個或幾個氨基酸且具有腈水解酶活性的蛋白質。

2.如權利要求1所述的腈水解酶，其特征在于，所述的(b)的蛋白質的氨基酸序列如序列表中SEQ?ID?No.4所示。

3.一種腈水解酶基因，其特征在于，所述的腈水解酶基因是如下(1)或(2)的基因：

(1)其堿基序列如序列表中SEQ?ID?No.1所示；

(2)編碼如下蛋白質(a)或(b)的基因：

(a)其氨基酸序列如序列表中SEQ?ID?No.2所示；

(b)在(a)的基礎上經過取代、缺失或添加一個或幾個氨基酸且具有腈水解酶活性的蛋白質。

4.如權利要求3所述的腈水解酶基因，其特征在于，所述的(b)的蛋白質的氨基酸序列如序列表中SEQ?ID?No.4所示。

5.一種包含如權利要求3或4所述的腈水解酶基因的重組表達載體。

6.一種重組表達轉化體，其特征在于，該重組轉化體包含如權利要求3或4所述的腈水解酶基因或如權利要求5所述的重組表達載體。

7.一種重組腈水解酶或含重組腈水解酶的微生物細胞的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：培養如權利要求6所述的重組表達轉化體，獲得重組表達的腈水解酶或含重組腈水解酶的微生物細胞。

8.一種如權利要求1所述的腈水解酶或含重組腈水解酶的微生物細胞作為催化劑以鄰氯扁桃腈或其結構類似物為底物進行水解反應，得到光學純(R)-鄰氯扁桃酸或其結構類似物的應用，所述的鄰氯扁桃腈或其結構類似物是如式(I)所示的化合物，所述的(R)-鄰氯扁桃酸或其結構類似物是如式(II)所示的化合物；

其中，R代表H，Cl。

9.如權利要求8所述的應用，其特征在于，所述的水解反應在單水相反應體系中進行，包括以下步驟：將含重組腈水解酶的微生物細胞懸浮于pH為6.0～9.0的緩沖水溶液中，加入式(I)所示的鄰氯扁桃腈或其結構類似物作為底物進行反應，從反應液中分離提取式(II)所示的光學純(R)-鄰氯扁桃酸或其結構類似物。

10.如權利要求8所述的應用，其特征在于，所述的水解反應在兩相反應體系中進行，包括以下步驟：將含重組腈水解酶的微生物細胞懸浮于pH為5.0～10.0的緩沖水溶液中，加入疏水性有機溶劑，加入式(I)所示的鄰氯扁桃腈或其結構類似物作為底物進行反應，從反應液中分離提取式(II)所示的光學純(R)-鄰氯扁桃酸或其結構類似物。