[發明專利]一種通過組織培養獲得大量小佛肚竹再生植株的方法

無效

• 申請號: 201210043777.7
• 申請日: 2012-02-26
• 公開（公告）號: CN102577958A
• 公開（公告）日: 2012-07-18
• 發明（設計）人: 丁雨龍;錢維杰;魏強;林樹燕
• 申請（專利權）人: 南京林業大學
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 上海正旦專利代理有限公司 31200
• 代理人: 陸飛;盛志范

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種獲得大量小佛肚竹再生苗的方法。

背景技術

小佛肚竹屬簕竹屬，又名葫蘆竹、佛竹、密節竹，是以特形稈作為觀賞性狀的重要觀賞竹之一。小佛肚竹一般具2種稈形：正常稈形的小佛肚竹稈下部略呈之字形曲折；畸形稈形的小佛肚竹節間短縮且腫脹呈花瓶狀。后一稈形常用于制作盆景及庭院栽培作觀賞用，其竹高25-60cm，直徑0.5-2cm，節間較短，一般只有2-5cm，或短縮腫脹呈花瓶狀，為著名的觀賞竹種，具有廣闊的市場前景（陳雙林,楊?希.觀賞竹種佛肚竹栽培及形態控制[J].福建林業科技,2001,28(1):79~80）。

然而，竹類植物開花間隔期長，開花期無法預測，且種子獲取十分困難，萌發率也低。因此，竹子繁殖主要以埋鞭、埋稈、埋節等傳統方法為主，這些方法具有消耗種竹多、種苗運輸不便、勞動強度大、繁殖系數低等缺點，小佛肚竹也是如此。而且，小佛肚竹畸形稈的變異不穩定，利用生物技術可以高效、快速地對作物品種性狀進行遺傳改良，從而為小佛肚竹再生植株的培養提供一種方便、快捷和有效的方法。

竹子組織培養方面的研究，最早見于1968年，Alexander和Rao關于竹子合子胚離體培養的簡報。國外比較系統開展竹子組織培養工作始于20世紀80年代。我國的竹子組織培養工作開展得較晚，20世紀90年代才開始，闕國寧等以黃竹和印度箣竹2種叢生竹的嫩節作為外植體誘導愈傷組織，最終形成完整植株?，F階段，國內通過以芽繁芽途徑來實現竹子植株的再生，其技術已趨于成熟，但通過愈傷組織途徑來實現植株的再生，報道并不多。

本發明針對背景技術的不足和缺陷，克服小佛肚竹組織培養過程中再生難的問題，通過不同生長調節劑的組合，設計出適合小佛肚竹再生的培養基，完成小佛肚竹植株再生的時間最快僅為15周左右。為小佛肚竹的快速繁殖和定向生物技術育種奠定了堅實的基礎。具有一定的社會效益和經濟效益，可以促進我國竹產業的發展。

發明內容

本發明的目的在于提供一種快速、大量獲得小佛肚竹再生植株的方法。

本發明提出的獲得小佛肚竹再生植株的方法，采用愈傷組織培養技術，包括小佛肚胚性愈傷組織的誘導、分化及植株再生等。具體步驟為：

（1）小佛肚竹胚性愈傷組織的誘導??

將無菌的再生芽的芽尖接種到愈傷誘導培養基進行愈傷誘導，愈傷組織形成四周后將其轉接到繼代培養基進行增殖培養，得到胚性愈傷組織；其中，所述愈傷誘導培養基為：以MS為基本培養基，再附加6mg/L2,4-D、0.001mg/LTDZ、0.5mg/L萘乙酸（NAA）組成，所述繼代培養基為：MS，5mg/L2,4-D，0.5mg/L6-BA，1mg/L?萘乙酸，100mg/L?Vc?。

（2）胚性愈傷組織的分化?

將胚性愈傷組織轉接到愈傷組織分化培養基上培養，至有再生芽分化形成，一般約一個月左右時間；其中，所述愈傷組織分化培養基為：MS，3mg/L6-BA，0.5mg/LNAA。

（3）小佛肚竹的植株再生????

將已經分化出再生芽的愈傷組織轉接到生根培養基中，進行生根培養，其中，所述生根培養基含MS，3mg/l?NAA，(0.1-0.5)mg/l?6-BA?。

待根生長至5cm時，可進行再生苗的移栽。再生苗移栽花盆中后置于植物生長室中（濕度在60%-80%，溫度（25±1℃），光周期為光照14h/黑暗10h）。

上述培養基組分中，MS為?MS培養基成分（Murashige?&?Skoog?medium，1962，Physiol.?Plant?15:473-497?），?2,4-D為2,4-二氯苯氧乙酸，TDZ為噻二唑苯基脲，6-BA為6-芐氨基腺嘌呤，Vc為?維生素C。

本發明方法獲得小佛肚竹的頻率高，適宜于小佛肚竹遺傳改良。?

附圖說明

圖1?小佛肚竹的枝芽外植體。

圖2?小佛肚竹枝芽誘導出的愈傷組織。

圖3?小佛肚竹愈傷組織在增殖培養基上生長一段時間后的愈傷組織。

圖4?小佛肚竹愈傷組織在分化培養基上分化一個月后長出芽體。

圖5?小佛肚竹愈傷組織在分化培養基上分化三個月后長出的芽叢。

圖6?小佛肚竹再生苗的生根。

圖7?移栽成功的小佛肚竹再生植株。

具體實施方式

小佛肚竹組織培養的方法獲得大量再生植株的方法的操作步驟如下：