[發明專利]抗毒素/抗血清中甘氨酸含量的測定方法

無效

• 申請號: 201210043736.8
• 申請日: 2012-02-24
• 公開（公告）號: CN102590428A
• 公開（公告）日: 2012-07-18
• 發明（設計）人: 吳笛;楊冬;羅靖雄
• 申請（專利權）人: 玉溪九洲生物技術有限責任公司
• 主分類號: G01N30/89
• 分類號: G01N30/89
• 代理公司: 昆明正原專利代理有限責任公司 53100
• 代理人: 徐玲菊

1.一種抗毒素/抗血清中甘氨酸含量的測定方法，包括分別吸取衍生化后的對照品溶液和衍生化后的供試品溶液，采用常規高效液相色譜法進行測定，再按常規方法測定甘氨酸和正纈氨酸的峰面積，以內標法計算，即得到抗毒素/抗血清中甘氨酸的含量，其特征在于所述衍生化后的對照品溶液和衍生化后的供試品溶液的制備經過下列各步驟：

（1）將內標物用水溶解，制成濃度為3～5mg/mL的內標物溶液；

（2）將對照品甘氨酸用水溶解，制成濃度為20～30mg/mL的對照品貯備液；在1.0mL對照品貯備液中加入9.0mL質量濃度為1.5%的磺基水楊酸，混勻后至少靜置2小時，在3000轉/分的轉速下離心分離10min，取分離后的上清液0.4mL，用水稀釋至10mL，即得到對照品溶液；

（3）取供試品抗毒素、抗血清1.0mL，向其中加入9.0mL質量濃度為1.5%的磺基水楊酸，混勻后至少靜置2小時，在3000轉/分的轉速下離心分離10min，取分離后的上清液1.0mL，用水稀釋至10mL，即得到供試品溶液；

（4）分別取步驟（2）所得對照品溶液和步驟（3）所得供試品溶液各0.4mL，在各溶液中分別加水1.6mL，再分別加步驟（1）所得內標物溶液0.08mL，渦旋混合15s，再分別加入1.0mL含三乙胺的乙腈溶液，三乙胺的濃度為1mol/L，混勻，接著分別加入1.0mL含異硫氰酸苯酯的乙腈溶液，異硫氰酸苯酯的濃度為0.1mol/L，渦旋混合30s，室溫放置1小時，最后分別加入正己烷4mL，振搖后放置10min，取下層溶液進行過濾，濾液即為衍生化后的對照品溶液和衍生化后的供試品溶液。

2.根據權利要求1所述的測定方法，其特征在于：所述步驟（1）的內標物為α-氨基丁酸或纈氨酸。

3.根據權利要求1所述的測定方法，其特征在于：所述采用高效液相色譜法的色譜條件為：反相液相色譜柱，以濃度為0.01～0.1mol/L、pH為6.5的醋酸鈉溶液為流動相A，以乙腈︰水的體積比為90︰10～70︰30的乙腈-水溶液為流動相B，用流速為1mL/min的洗脫液進行梯度洗脫，并采用紫外檢測器，其檢測波長為245～265nm。