[發(fā)明專利]拓寬雙抗體夾心免疫檢測濃度范圍的方法及其試劑盒

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210043004.9
• 申請日: 2012-02-24
• 公開（公告）號: CN103293299A
• 公開（公告）日: 2013-09-11
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 吳馮波
• 申請（專利權(quán)）人: 上海新波生物技術(shù)有限公司
• 主分類號: G01N33/543
• 分類號: G01N33/543
• 代理公司: 上海浦一知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31211
• 代理人: 高月紅

1.一種拓寬雙抗體夾心免疫檢測濃度范圍的方法，其特征在于：包括以下步驟：

(1)用捕獲抗體包被固相材料；

(2)以信號生成物質(zhì)標記示蹤抗體；

(3)當校準品或樣本中的待測抗原濃度過高，或者檢測信號超出儀器的檢測上限時，使用未標記的示蹤抗體稀釋已標記的示蹤抗體；

(4)通過捕獲抗體及示蹤抗體，與校準品或樣本中的待測抗原發(fā)生免疫反應(yīng)，形成雙抗體夾心復合物：捕獲抗體-待測抗原-示蹤抗體；檢測信號生成物質(zhì)產(chǎn)生的信號強度，用于檢測樣本中待測抗原的含量。

2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：所述步驟(1)中，固相材料，包括：孔狀或管狀固相，微球狀固相，纖維膜；

步驟(1)中，包被的步驟，包括：

(a)將捕獲抗體溶解于包被緩沖液，使抗體濃度為1.0～10.0μg/ml，將該溶液與固相材料接觸并靜置5～24小時；

(b)用含表面活性劑的緩沖液作為洗滌緩沖液，洗滌步驟(a)制備的捕獲抗體包被的固相材料后，加入含封閉蛋白的緩沖液，靜置3～12小時；

(c)棄去含封閉蛋白的緩沖液，干燥固相材料，完成捕獲抗體包被固相材料的制備。

3.如權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于：所述孔狀或管狀固相包括：微孔，試管；

微球狀固相包括：磁微球，乳膠微球；

纖維膜包括：硝酸纖維素膜、尼龍膜；

步驟(a)中，包被緩沖液包括：50mM?pH9.5?CB緩沖液，其中，該緩沖液中含有：50mMNa₂CO₃-NaHCO₃、150mM?NaCl、0.05％的NaN₃；

步驟(b)中，含表面活性劑的緩沖液，包括：含0.1％Tween-20的50mM?pH7.8?TSA緩沖液，其中，50mM?pH7.8?TSA緩沖液中含有：50mM?Tris、150mM?NaCl、1％BSA、16％的蔗糖；

步驟(c)中，含封閉蛋白的緩沖液，包括：含0.5％酪蛋白的0.1％Tween-20的50mM?pH7.8TSA緩沖液。

4.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：所述步驟(2)中，信號生成物質(zhì)包括：酶、熒光物質(zhì)、稀土離子、化學發(fā)光物質(zhì)、電化學發(fā)光物質(zhì)。

5.如權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于：所述酶包括：辣根過氧化物酶、堿性磷酸酶；

熒光物質(zhì)包括：異硫氰酸熒光素、熒光素；

稀土離子包括：Eu³⁺、Sm³⁺、Tb³⁺、Dy³⁺及其螯合物配基；

化學發(fā)光物質(zhì)包括：丫啶酯及其衍生物；

電化學發(fā)光物質(zhì)包括：多環(huán)芳烴類、酰肼類、聯(lián)吡啶類化合物以及三聯(lián)吡啶釕。

6.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：所述步驟(3)、(4)中，樣本包括：血清、血漿、全血、尿液、唾液。

7.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：所述步驟(4)中，檢測樣本中待測抗原的步驟，包括：

I、包被有捕獲抗體的固相材料中加入樣本；

II、加入含信號生成物質(zhì)標記的示蹤抗體后，固相材料表面的捕獲抗體及示蹤抗體與樣本待測抗原發(fā)生免疫反應(yīng)，形成捕獲抗體-待測抗原-示蹤抗體復合物；

III、洗滌除去未結(jié)合的含信號生成物質(zhì)標記的示蹤抗體；

IV、根據(jù)示蹤抗體所含的信號生成物質(zhì)所產(chǎn)生的信號強弱，確定樣本中待測抗原的濃度。

8.如權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于：所述步驟II中，含信號生成物質(zhì)標記的示蹤抗體，包括：含信號生成物質(zhì)標記的示蹤抗體與未標記的示蹤抗體混合物。

9.如權(quán)利要求1所述的拓寬雙抗體夾心免疫檢測濃度范圍的檢測試劑盒，其特征在于：包括：包被有捕獲抗體的固相材料，信號生成物質(zhì)標記的示蹤抗體，未以信號生成物質(zhì)標記的示蹤抗體。

10.如權(quán)利要求9所述的試劑盒，其特征在于：還包括：校準品，洗滌緩沖液，增強液；

其中，該增強液包括：含1.0％冰乙酸和2.0％鄰苯二甲酸氫鉀的緩沖液，pH?3.0-4.5該緩沖液中同時含有0.4％β-萘基甲酰三氟丙酮、2％三正辛基氧膦、0.1％、Triton?X-100。