[發明專利]一種檢測食品中呋喃它酮代謝物含量的方法

有效

• 申請號: 201210042064.9
• 申請日: 2012-02-23
• 公開（公告）號: CN102621326A
• 公開（公告）日: 2012-08-01
• 發明（設計）人: 鄧安平;宋娟;楊紅
• 申請（專利權）人: 蘇州大學
• 主分類號: G01N33/64
• 分類號: G01N33/64;G01N33/531
• 代理公司: 北京瑞思知識產權代理事務所(普通合伙) 11341
• 代理人: 李濤

1.一種檢測食品中呋喃它酮代謝物含量的方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：

步驟一：AMOZ修飾物的制備；

步驟二：免疫原和包被抗原的制備；

步驟三：AMOZ單克隆抗體的制備；

步驟四：建立測定AMOZ的酶聯免疫吸附分析方法；

步驟五：ELISA對加標樣品中AMOZ含量的測定。

2.根據權利要求1所述的方法，其中，所述步驟一包括：

1)CPAMOZ?I的合成

稱取3-羧基苯甲醛加入反應瓶，用無水甲醇溶解，再加入AMOZ，溶解完全后，65℃氮氣保護下反應5～12小時，取出，將反應液離心，棄去上層清夜，沉淀用冰無水乙醇洗滌后，得白色沉淀，真空抽干，4℃下保存，產物簡寫為CPAMOZ?I，其反應式如下：

2)CPAMOZII的合成

稱取4-羧基苯甲醛加入反應瓶，用無水甲醇溶解，再加入AMOZ，溶解完全后，65℃氮氣保護下反應5～12小時，取出，將反應液離心，棄去上層清夜，沉淀用冰無水乙醇洗滌后，得白色沉淀，真空抽干，4℃下保存，產物簡寫為CPAMOZ?II，其反應式如下：

3)CPAMOZIII的合成

稱取4-甲酰苯氧基乙酸加入反應瓶，用無水甲醇溶解，再加入AMOZ，溶解完全后，65℃氮氣保護下反應5～12小時，取出，將反應液離心，棄去上層清夜，沉淀用冰無水?乙醇洗滌后，得白色沉淀，真空抽干，4℃下保存，產物簡寫為CPAMOZIII，其反應式如下：

4)CPAMOZ?I、CPAMOZ?II和CPAMOZ?III的表征：

¹H-NMR譜：用Bruker?AMX-300核磁共振儀測試CPAMOZ?I、CPAMOZ?II和CPAMOZ?III的核磁譜，以氘代二甲亞楓溶液為溶劑，內標為TMS；

CPAMOZ?I?¹H-NMR(DMSO，δvs?TMS)：13.164(s，1H，-COOH)，7.953(t，4H，C₆H)，8.332(S，1H，CH＝N)；4.930(S，2H，-O-(CH₂)₂)。；

CPAMOZ?II?¹HNMR(DMSO，δvs?TMS)：13.039(s，1H，-COOH)，7.828(d，4H，C₆H)，7.916(S，1H，CH＝N)，4.931(S，2H，-O-(CH₂)₂)。；

CPAMOZ?III?¹HNMR(DMSO，δvs?TMS)：12.934(s，1H，-COOH)，6.999-7.666(t，4H，C₆H)，7.796(S，1H，CH＝N)，4.914(S，2H，-O-(CH₂)₂)，4.735(S，2H，-O-CH₂-COOH)。

3.根據權利要求1所述的方法，其中，所述步驟二包括：

分別稱取CPAMOZ?I或CPAMOZ?II，或CPAMOZ?III和二環己基碳二亞胺，N-羥基琥珀酰亞胺，一同溶解于二甲基甲酰胺中，室溫下攪拌過夜，將混合液離心5～20分鐘，取上層清液，緩慢加入到0.01～0.02％的牛血清白蛋白即BSA和0.01～0.02％卵清白蛋白即OVA，攪拌1～10小時，離心分離，取上層清液，透析數天，溶液冷凍干燥，置冰箱中存放，其中，CPAMOZ?I-BSA、CPAMOZ?II-BSA和CPAMOZ?III-BSA為免疫原；CPAMOZ?I-OVA、CPAMOZ?II-OVA和CPAMOZ?III-OVA為包被抗原。

4.根據權利要求1所述的方法，其中，所述步驟四包括：

(1)溶液配制；

(2)間接競爭ELISA步驟；

(3)ELISA的優化條件和靈敏度；?

(4)ELISA的標準曲線；

(5)ELISA的特異性。