[發明專利]用于分選帶有X或Y染色體富集群的精子懸浮液

有效

• 申請號: 201210040778.6
• 申請日: 2005-03-29
• 公開（公告）號: CN102586179A
• 公開（公告）日: 2012-07-18
• 發明（設計）人: C·L·路德維格;K·S·克勞利;C·N·格拉維斯
• 申請（專利權）人: 英格朗公司
• 主分類號: C12N5/076
• 分類號: C12N5/076
• 代理公司: 北京市中咨律師事務所 11247
• 代理人: 史文靜;黃革生

本申請為2005年3月29日提交的、發明名稱為“用于分選帶有X或Y染色體富集群的精子懸浮液”的PCT申請PCT/US2005/010481的分案申請，所述PCT申請進入中國國家階段的日期為2006年11月28日，申請號為200580017370.5。

發明領域

本發明主要涉及分選精子細胞的方法。更具體而言，本發明涉及制備精子細胞運動性相對于體內射精精子降低的懸浮液，更具體而言是運動性暫時降低；所述懸浮液可用于如將精子細胞分選為帶有X或Y染色體的富集精子細胞群的方法。

發明背景

通過人工授精(AI)使動物受精以及體外受精后的胚胎移植已經是一項成熟的技術。在家畜產業中，能夠對繁殖結果施加影響而使其后代具有一種或多種所需特征，有明顯的優勢。例如，乳制品產業中如能預先選擇后代有利于雌性而保證奶牛的產量，則會帶來經濟效益。將精子分離為富集的帶有X和Y染色體的細胞群，即所謂的性別富集精液或性別富集精子，便是達到后代預選目的的方法之一。

為得到性別富集精液，必須將精子細胞以染料染色，然后分選為帶有X和Y染色體的細胞。染色和分選過程的每一步對于精子細胞而言都是應激，會導致精子細胞的存活力或運動性，特別是前向性運動性降低。

Salisbury等人描述了將公牛射出的精液直接收集至稀釋液中的技術，所述稀釋液可抑制細胞的運動性并防止其從周圍精漿中吸收糖。當收集射出精液至稀釋液中，且通過充氣100％的CO₂替換液體上方的氣相時，射出精液內的細胞會喪失運動性。只要將細胞留存于該稀釋液中且排除空氣，就可以保證其在室溫下數小時不運動，而在5℃時可維持至少8天。

發明概述

本發明的多方面之一涉及精子懸浮液，所述精子懸浮液可用于如將精子分選為帶X或Y染色體的富集精子群的方法。

因此簡言之，本發明涉及含有活精子以及下調精子糖攝取的組合物的精子細胞懸浮液，所述懸浮液中的精子濃度小于約1×10⁶精子/ml或至少為1×10⁸精子/ml。

本發明還涉及含有不運動活精子的精子細胞懸浮液，所述懸浮液中的精子濃度小于約1×10⁶精子/ml或至少為1×10⁸精子/ml。

本發明還涉及含有活精子的精子細胞懸浮液，所述精子相對于同一種系體內射出的精子更具附睪中精子的運動性特點，所述懸浮液中的精子濃度小于約1×10⁶精子/ml或至少為1×10⁸精子/ml。

本發明還涉及含有活精子、鉀、并任選地含有鈉的精子細胞懸浮液，所述懸浮液中的精子濃度至少為1×10⁸精子/ml，而鉀與鈉的摩爾比大于各1∶1。

本發明還涉及含有活精子、下調精子糖攝取的組合物、以及DNA選擇性染料的精子細胞懸浮液。

本發明還涉及含有不運動活精子和DNA選擇性染料的精子細胞懸浮液。

本發明還涉及含有活精子和DNA選擇性染料的精子細胞懸浮液，所述精子相對于同一種系體內射出的精子，其代謝率和運動性更具附睪中精子的特點。

本發明還涉及含有不運動活精子的精子細胞懸浮液，所述精子的DNA上結合有DNA選擇性染料。

本發明還涉及含有活精子的精子細胞懸浮液，相對于同一種系體內射出的精子而言，所述精子代謝率和運動性更具附睪中精子的特點，且其DNA上還結合有DNA選擇性染料。

本發明還涉及對精子細胞染色的方法，所述方法包括形成這樣的染色混合物，其含有完整的活精子細胞、運動抑制性量的鉀，以及DNA選擇性染料。

本發明還涉及形成用于流式細胞術方法的精子細胞懸浮液的方法，所述方法包括將精子細胞源與抑制精子細胞運動性的組合物混合，以形成精子細胞懸浮液，所述懸浮液中精子細胞濃度小于約1×10⁶精子細胞/ml或至少為1×10⁸精子細胞/ml。

本發明還涉及形成用于流式細胞術方法的精子細胞懸浮液的方法，所述方法包括將哺乳動物射出精液收集至含有抑制性量的運動抑制劑的緩沖液中以形成精子懸浮液，所述懸浮液中含有精子濃度小于約1×10⁶精子細胞/ml或至少為1×10⁸精子細胞/ml。

本發明的其它方面和特征是顯而易見的，部分將于后文說明。