[發明專利]用于診斷草魚呼腸孤病毒的三重PCR檢測引物組、試劑盒及方法

無效

• 申請號: 201210039379.8
• 申請日: 2012-02-21
• 公開（公告）號: CN102534050A
• 公開（公告）日: 2012-07-04
• 發明（設計）人: 曾偉偉;王慶;吳淑勤;王英英;張樂生;石存斌
• 申請（專利權）人: 中國水產科學研究院珠江水產研究所
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 廣州嘉權專利商標事務所有限公司 44205
• 代理人: 譚英強

1.草魚呼腸孤病毒的三重PCR檢測引物組，由以下3對引物組成：

引物對1

P01-F：5'?GCC?ACC?TTT?GAG?CGC?GAG?AC?3'(SEQ?ID?NO：1)；

P01-R：5'?GTT?AGG?GCG?GAA?AGC?ATA?CCA?GA?3'(SEQ?ID?NO：2)；

引物對2

P02-F：5'?GCT?GAT?GCT?GCA?GAC?GGC?TAA?AC?3'(SEQ?ID?NO：3)；

P02-R：5'?TAA?TTG?CCT?GCT?GCG?CTG?ACT?3'(SEQ?ID?NO：4)；

引物對3

P03-F：5'?GGC?GGC?ATG?AAT?ATG?TAT?CGA?CT?3'(SEQ?ID?NO：5)；

P03-R：5'?TAT?GTG?ATT?ACG?CGG?GTC?AG?3'?(SEQ?ID?NO：6)。

2.草魚呼腸孤病毒的三重PCR檢測試劑盒，包括引物液、Tap?DNA聚合酶、PCR?buffer、dNTP混合物，所述引物液含有權利要求1所述的引物組。

3.草魚呼腸孤病毒的三重PCR檢測方法，包括如下步驟：

1）提取待檢組織總RNA；

2）對待檢樣品總RNA進行逆轉錄反應；

3）將權力要求1所述引物組中的三對引物按等物質的量比例混合后加入PCR反應體系中，以反轉錄產物cDNA為模板，進行PCR擴增反應；

4）根據PCR擴增結果判斷待檢樣品是否感染草魚呼腸孤病毒及判斷病毒的基因型。

4.根據權力要求3所述的檢測方法，其特征在于，所述PCR反應體系為25μL，包括權利要求1所述的引物組，其中每條引物（SEQ?ID?NO:1~6）的終濃度均為1pmol/μL，2.5μL?10×PCR?buffer，5U?Tap?DNA聚合酶，終濃度各為0.1mM的dNTP混合物，用10μL反轉錄產物cDNA作為模板，用水補至25μL。

5.根據權利要求3所述的檢測方法，其特征在于，PCR擴增反應程序為：95℃℃預變性5min，94℃變性30s，53.6℃退火30s，72℃延伸40s，循環30次，72℃延伸10min。