[發明專利]一種防治根瘤線蟲的菌株培養液及其制備方法

無效

• 申請號: 201210038626.2
• 申請日: 2012-02-21
• 公開（公告）號: CN102533613A
• 公開（公告）日: 2012-07-04
• 發明（設計）人: 金泰完;金孝炫;南旭浩
• 申請（專利權）人: 沈陽麥克斯生物工程有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;A01N63/00;A01P5/00;C12R1/01
• 代理公司: 沈陽優普達知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 21234
• 代理人: 俞魯江

1.一種防治根瘤線蟲的菌株培養液，其特征在于，其主要組成為名稱為Photorhabdus?temperata.?subsp.?Temperate的菌株。

2.一種權利要求1所述的防治根瘤線蟲的菌株培養液的制備方法，其特征在于，昆蟲病原性線蟲(Heterorhabditis?bacteriophora)先后經過粉碎、分離、接種培養、提取后得到所述的菌株培養液。

3.根據權利要求2所述的防治根瘤線蟲的菌株培養液的制備方法，其特征在于，具體的制備步驟為，

（1）粉碎、分離

將昆蟲病原性線蟲(Heterorhabditis?bacteriophora)置于含鏈霉素0.06wt%的NaClO溶液中進行30～40min的消毒，每500～800只昆蟲病原性線蟲用300ppm的上述NaClO溶液；

消毒后用勻漿機將線蟲全部磨碎，磨碎后的漿液置于瓊脂培養基（MacConkey?agar）中，將發出粉紅色熒光的這部分細菌取出，置于NBTA培養基中進行二次分離，最后將圍繞群體白帶的綠色群體取出備用；

（2）接種培養

將步驟（1）得到的菌種按2.0%的接種量接種到5wt%的YS培養基中，在25～35℃、250～350rpm的條件下培養3～5天，然后將培養基中的紅色群體取出備用；

（3）提取

向步驟（2）得到的群體中加入2倍體積的2-異丙醇，用超聲波處理1-2小時，在4℃下放置24小時，除去培養液其它多糖類物質；

接著將培養液置于離心分離機中，以12,000xg進行40分鐘的離心分離，以GF/F濾紙濾去細胞后即得所述的菌株培養液。

4.根據權利要求3所述的防治根瘤線蟲的菌株培養液的制備方法，其特征在于，步驟（1）中所述的瓊脂培養基的組成及配比為，1L蒸餾水中，含蛋白胨17g，蛋白間質蛋白胨3g，乳糖酶10g，氯化鈉5g，膽汁酸鹽1.5g，細菌用瓊脂13.5g，中性紅0.03g，結晶紫0.001g；

NBTA培養基的組成及配比為，1L蒸餾水中，含牛肉膏3g，蛋白胨5g,?細菌營養用瓊脂15g，溴麝香草酚藍0.025g，2,3,5-三苯基氯化四氮唑（TTC）0.04g。

5.根據權利要求3所述的防治根瘤線蟲的菌株培養液的制備方法，其特征在于，步驟（2）中的YS培養基的原料為食用油，卵黃粉，膽固醇，豬油，卵磷脂，全脂粉乳，氯化鈉，磷酸二氫鉀、酵母提取物中的一種以上。

6.根據權利要求3所述的防治根瘤線蟲的菌株培養液的制備方法，其特征在于，步驟（3）中的2-異丙醇的溫度為0～5℃。