[發(fā)明專利]檢測b型流感嗜血桿菌發(fā)酵液不同發(fā)酵時間剩余的葡萄糖濃度的方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210036480.8
• 申請日: 2012-02-17
• 公開（公告）號: CN102621140A
• 公開（公告）日: 2012-08-01
• 發(fā)明（設計）人: 羅芹;韓煉;趙丹;朱琳
• 申請（專利權(quán)）人: 成都歐林生物科技股份有限公司
• 主分類號: G01N21/79
• 分類號: G01N21/79
• 代理公司: 成都金英專利代理事務所(普通合伙) 51218
• 代理人: 袁英

技術領域

本發(fā)明涉及一種檢測葡萄糖濃度的方法，特別是檢測b型流感嗜血桿菌發(fā)酵液不同發(fā)酵時間剩余的葡萄糖濃度的方法。

背景技術

通過測定不同發(fā)酵時間段b型流感嗜血桿菌發(fā)酵液中葡萄糖的含量變化情況，可以基本上表征出發(fā)酵過程中菌的生長情況，也可以對其發(fā)酵動力學及發(fā)酵過程中代謝產(chǎn)物的量有一定的表征，根據(jù)測定結(jié)果適時補充所需葡萄糖，可以促進更好的達到發(fā)酵目的。

目前發(fā)酵液糖含量的測定主要有斐林法，3,5-二硝基水楊酸比色法（DNS法）、HPLC、葡萄糖試劑盒以及葡萄糖傳感儀幾種方式。其中斐林法對實驗環(huán)境及實驗者的滴定手法要求非常嚴格，因此測定結(jié)果重現(xiàn)性較差，不同實驗者出現(xiàn)偏差較大；DNS法發(fā)酵液需經(jīng)過處理，測定過程較為繁瑣，測定時間較長；HPLC、葡萄糖試劑盒及葡萄糖傳感儀成本較高。由于發(fā)酵液成分復雜，上述方法存在干擾現(xiàn)象，檢測準確度不高。?

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術的缺點，提供一種檢測b型流感嗜血桿菌發(fā)酵液不同發(fā)酵時間剩余的葡萄糖濃度的方法，可直觀、準確、迅速的檢測發(fā)酵液中葡萄糖的含量，具有檢測結(jié)果穩(wěn)定、檢測時間短，檢測過程簡捷、成本低的優(yōu)點。

本發(fā)明的目的通過以下技術方案來實現(xiàn)：檢測b型流感嗜血桿菌發(fā)酵液不同發(fā)酵時間剩余的葡萄糖濃度的方法，它包括以下步驟：?

A、以任一時間段的Hib發(fā)酵液的樣品作為供試品，取供試品2ml置于250ml錐形瓶中，加水25ml，精密加入堿性銅試液25ml；

B、加熱回流使其在3分鐘內(nèi)沸騰，并連續(xù)沸騰5分鐘，迅速冷卻至室溫，期間保證瓶中氧化亞銅不與空氣接觸，后立即加入25%碘化鉀溶液15ml，搖勻，隨振搖隨緩緩加入硫酸溶液（1→5）25ml；

C、待二氧化碳停止放出后，立即用0.1mol/L的硫代硫酸鈉滴定液滴定，滴定至近終點時，加淀粉指示液2ml，繼續(xù)滴定至藍色消失；

D、取水2ml做一空白試驗；

E、發(fā)酵液零小時樣品的測定，其包括以下步驟：

1）、取2ml發(fā)酵液零小時樣品，即加糖不加菌的樣品，置于250ml錐形瓶中，加水25ml，精密加入堿性銅試液25ml；

2）、加熱回流使其在3分鐘內(nèi)沸騰，并連續(xù)沸騰5分鐘，迅速冷卻至室溫，期間保證瓶中氧化亞銅不與空氣接觸，立即加25%碘化鉀溶液15ml，搖勻，隨振搖隨緩緩加入硫酸溶液（1→5）25ml；

3）、待二氧化碳停止放出后，立即用0.1mol/L的硫代硫酸鈉滴定液滴定，滴定至近終點時，加淀粉指示液2ml，繼續(xù)滴定至藍色消失；

F、以發(fā)酵液零小時樣品消耗滴定液的體積為100%，其余樣品消耗滴定液體積與發(fā)酵零小時樣品消耗的滴定液體積進行比較，得到發(fā)酵液不同時段剩余葡萄糖含量占初始葡萄糖含量的百分比。

本發(fā)明具有以下優(yōu)點：

本發(fā)明用檢測還原糖的原理，測定發(fā)酵液中不同發(fā)酵時間下的葡萄糖含量，可消除大部分干擾，準確度較高；采用了百分比的形式處理實驗數(shù)據(jù)，更直觀的表達了整個發(fā)酵過程菌的生長情況，解決了發(fā)酵過程中實時監(jiān)控葡萄糖含量的問題，且檢測結(jié)果穩(wěn)定、檢測時間短，檢測過程簡捷、成本低。

本發(fā)明由于可直觀、準確、迅速的檢測發(fā)酵液中葡萄糖的含量水平，可作為判斷菌體生長情況的重要依據(jù)，同時可及時監(jiān)控菌體生長環(huán)境中碳源是否充足，為發(fā)酵過程的補料提供重要依據(jù)。

具體實施方式

下面結(jié)合實施例對本發(fā)明做進一步的描述：

實施例1：分別取發(fā)酵0小時、1小時、2小時、3小時、4小時、5小時、6小時的Hib發(fā)酵液作為供試品，依次按下述方法進行葡萄糖含量檢測。

檢測b型流感嗜血桿菌發(fā)酵液不同發(fā)酵時間剩余的葡萄糖濃度的方法包括以下步驟：?

A、以任一時間段的Hib發(fā)酵液的樣品作為供試品，取供試品2ml置于250ml錐形瓶中，加水25ml，精密加入堿性銅試液25ml；

B、加熱回流使錐形瓶中溶液在3分鐘內(nèi)沸騰，并連續(xù)沸騰5分鐘，迅速冷卻至室溫，期間保證瓶中氧化亞銅不與空氣接觸，后立即加入25%碘化鉀溶液15ml，搖勻，隨振搖隨緩緩加入硫酸溶液（1→5）25ml；

C、待二氧化碳停止放出后，立即用0.1mol/L的硫代硫酸鈉滴定液滴定，滴定至近終點時，加淀粉指示液2ml，繼續(xù)滴定至藍色消失；

D、取水2ml做一空白試驗；

E、發(fā)酵液零小時樣品的測定，其包括以下步驟：