[發明專利]一種快速檢測篩選金黃色葡萄球菌的方法

無效

• 申請號: 201210035468.5
• 申請日: 2012-02-16
• 公開（公告）號: CN102590506A
• 公開（公告）日: 2012-07-18
• 發明（設計）人: 趙渝;陳艷;顧鳴
• 申請（專利權）人: 上海師范大學
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569
• 代理公司: 上海伯瑞杰知識產權代理有限公司 31227
• 代理人: 吳瑾瑜

1.一種快速檢測篩選金黃色葡萄球菌的方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)免疫化的超順磁納米粒子加入到待測樣品，30～40℃混合反應20～60min，使免疫化的超順磁納米粒子與金黃色葡萄球菌發生特異性結合；

(2)外加磁場，在外加磁場吸引作用下，收集免疫化的超順磁納米粒子，洗滌后加入免疫化的熒光量子點，30～40℃混合反應20～60min，使量子點和吸附在免疫化超順磁納米粒子表面的金黃色葡萄球菌發生特異性結合；

(3)利用外加磁場收集免疫化超順磁納米粒子，洗滌后定性或定量熒光檢測；

所述的免疫化超順磁納米粒子為表面偶聯人免疫球蛋白IgG的磁性粒子；所述的免疫化熒光量子點為與人免疫球蛋白IgG連接的量子點。

2.權利要求1所述速檢測篩選金黃色葡萄球菌的方法，其特征在于，所述的免疫化超順磁納米粒子的制備方法包括以下步驟：

(1)醛基化磁珠的制備：將以四氧化三鐵為核心的納米磁珠與聚乙二醇混合，加入體積濃度為60％～70％的乙醇水溶液，再依次加入丙烯醛、苯乙烯、二乙烯苯和過氧化苯甲酰，攪拌30min；60～70度下反應9～12h，洗滌，用磁場分離，收集固體，獲得醛基化磁珠；

(2)、連接抗體：步驟(1)中制得的醛基化磁珠中加入含有人免疫球蛋白IgG的磷酸緩沖溶液，2～6℃振蕩2～4小時；IgG與醛基化磁珠的質量比為1∶8～20；取固體洗滌。

3.權利要求2所述速檢測篩選金黃色葡萄球菌的方法，其特征在于，四氧化三鐵為核心的納米磁珠與聚乙二醇、丙烯醛、苯乙烯、二乙烯苯和過氧化苯甲酰的重量比為1∶80～150∶10～20∶200～300∶80～120；IgG與醛基化磁珠的質量比為1∶8～10。

4.權利要求1所述速檢測篩選金黃色葡萄球菌的方法，其特征在于，所述的免疫化熒光量子點的制備方法包括以下步驟：

(A)將pH?7.25～7.5、含有交聯劑的磷酸緩沖液與表面修飾有羧基的量子點混合，反應5～20min以活化羧基；反應時交聯劑的濃度為10～50mg/mL；

(B)加入保護劑反應20～60min；保護劑濃度為5mg/mL至20mg/mL；

(C)加入人類免疫球蛋白IgG混合，反應0.5～4hr，除去未反應的人類免疫球蛋白IgG，收集免疫化熒光量子點。

5.權利要求4所述速檢測篩選金黃色葡萄球菌的方法，其特征在于，所述人類免疫球蛋白IgG與量子點的用量比為20～40g/mol。

6.權利要求4所述速檢測篩選金黃色葡萄球菌的方法，其特征在于，所述交聯劑為1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽，保護劑為N-羥基硫代琥珀酰亞胺。

7.權利要求4所述速檢測篩選金黃色葡萄球菌的方法，其特征在于，步驟(2)和(3)所述的外加磁場為2000～6500Gs。