[發明專利]一種通過促進活性蛋白聚集體解聚提高淀粉脫支酶產量的方法

有效

• 申請號: 201210035298.0
• 申請日: 2012-02-16
• 公開（公告）號: CN102533701A
• 公開（公告）日: 2012-07-04
• 發明（設計）人: 吳敬;陳晟;段緒果;陳堅
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: C12N9/44
• 分類號: C12N9/44;C12R1/19
• 代理公司: 北京匯信合知識產權代理有限公司 11335
• 代理人: 王秀麗

1.一種通過促進活性蛋白聚集體解聚提高淀粉脫支酶產量的方法，其特征在于以含有重組淀粉脫支酶編碼基因的大腸桿菌為生產菌株，發酵工藝如下：

將活化后的種子培養液接入發酵培養基中，通過控制攪拌轉速和通風量使溶氧維持20-30％，控制溫度為25-37℃，流加氨水控制pH?7.0±0.5，培養5-6小時；

待溶氧上升至80-100％，以指數流加的方式補加補料液使溶氧維持在20-30％，溫度維持在25-37℃，流加氨水控制pH?7.0±0.5，當菌體OD600達到15-30時補加0.75-1.5％(m/V)的甘氨酸；

繼續培養至菌體吸光度OD600達到45-60時，降溫至23-30℃，通過補加乳糖溶液，使發酵液剩余乳糖濃度控制在4-6g/L；同時溶氧控制在20-30％，控制pH?7.0±0.5，誘導5-20小時，添加吐溫80后再繼續發酵1-10小時。

2.根據權利要求2所述的方法，其特征在于所述Tween?80的添加量為1-10g/L。

3.根據權利要求2所述的方法，其特在在于菌體吸光度OD600達到45-60時，降溫至25℃。

4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于種子活化用培養基的組成為：工業級蛋白胨10g/L，工業級酵母粉5g/L，NaCL?10g/L，pH?7.10。

5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于所述發酵培養基的組成為：甘油6g/L，工業級蛋白胨12g/L，工業級酵母粉24g/L，KH2PO4?2.31g/L，K2HPO4?3H2O?16.43g/L，微量元素液10mL/L。

6.根據權利要求4所述的方法，其特征在于所述種子培養基中還含有氨芐青霉素，濃度為100mg/L。

7.根據權利要求5所述的方法，其特征在于所述發酵培養基中還含有氨芐青霉素濃度為100mg/L。