[發明專利]基于農藥介入后轉Bt基因水稻對褐飛虱生態安全性評價的方法

無效

• 申請號: 201210034556.3
• 申請日: 2012-02-16
• 公開（公告）號: CN102577897A
• 公開（公告）日: 2012-07-18
• 發明（設計）人: 楊國慶;石朝鵬;杜尚根
• 申請（專利權）人: 揚州大學
• 主分類號: A01G16/00
• 分類號: A01G16/00;A01G7/00
• 代理公司: 南京知識律師事務所 32207
• 代理人: 盧亞麗

技術領域

本發明涉及一種基于農藥介入后轉Bt基因水稻對褐飛虱安全性評價的方法。

背景技術

水稻是我國最重要的糧食作物之一，害蟲是造成水稻產量損失的重要因素，如鱗翅目害蟲（二化螟、三化螟、大螟和稻縱卷葉螟等）造成的損失占亞洲年產量的2%～10%，我國每年因蟲害造成的損失占水稻總產量的5%以上。隨著生物技術的進步，抗鱗翅目害蟲轉Bt基因（蘇云金芽胞桿菌）水稻品種成功問世，且很多研究證實它們對靶標害蟲具有明顯的抗性。但轉Bt基因水稻并沒有在世界范圍內廣泛地商業化生產，這很大程度上取決于它們的生態環境安全性和食品安全性。在生態環境安全性評價中，對非靶標害蟲發生風險的評價是抗鱗翅目害蟲轉Bt基因水稻安全性評價的重要內容。

轉Cry2A基因（一種毒蛋白表達基因）水稻T2A-1來自華中農業大學作物遺傳改良國家重點實驗室分子生物學分室，轉基因植物中引入的目的基因是人工改造合成的蘇云金芽胞桿菌（Bacillus?thuringiensis，Bt）。自2005年，轉基因抗蟲水稻T2A-1已先后在湖北省進行了中間試驗和環境釋放，試驗結果表明，T2A-1遺傳穩定，對非靶標生物無害且農藝性狀與原品種明恢63基本一致，對水稻主要危害性螟蟲（二化螟和稻縱卷葉螟）具有極強和專一的毒性，但對非鱗翅目害蟲均無任何抗性，尤其如水稻近年連續暴發成災的重要害蟲褐飛虱。為此，國內很多專家建立了一些轉Bt基因水稻對稻飛虱影響的評價方法，如在轉Bt基因水稻上人工飼養褐飛虱考察該害蟲生長發育狀況，或田間調查該害蟲在轉Bt基因水稻上的發生危害情況。這些方法能基本反應轉Bt基因水稻對褐飛虱的直接影響，但卻沒有考慮水稻生產過程中其他環境因素的影響，尤其如化學防治的農藥對褐飛虱的作用。實際上，雖然轉Bt基因水稻可以對靶標鱗翅目害蟲有較好的控制效果，但田間針對轉Bt基因水稻非靶標害蟲的化學農藥無疑將繼續使用。因此，建立一種農藥介入后轉Bt基因水稻對褐飛虱安全性評價的方法，將更加實際地為轉Bt基因水稻中褐飛虱有效防控提供重要的技術支持。

發明內容

本發明的目的是針對上述現狀，旨在提供一種能切實為轉Bt基因水稻對非靶標重要害蟲褐飛虱的發生危害作出安全評價、易于推廣使用的基于農藥介入后轉Bt基因水稻對褐飛虱安全性評價的方法。

本發明的實現方式為，基于農藥介入后轉Bt基因水稻對褐飛虱安全性評價的方法，包括以下步驟：

1）農藥的選擇：選用三唑磷、井岡霉素原藥，濃度設置：三唑磷10、20、40、80ppm；井岡霉素100、200、400、800ppm；

2）處理方法：采用盆栽水稻接蟲法，噴霧法施藥；

3）噴藥：在分蘗期噴灑盆栽水稻，噴灑時按農藥濃度由低到高的順序噴施，噴霧處理水稻葉片和莖干部分；處理后的盆栽水稻覆蓋網罩，每個處理和對照均設置5個重復，以噴水作為對照代表未用農藥處理；

4）安全性考察：

①褐飛虱種群生命參數：轉Bt基因水稻和親本對照水稻同時分別噴藥24h后，采集長勢一致的水稻中下部莖桿，置于玻璃杯內，兩株水稻/杯，后每杯接初孵褐飛虱若蟲10頭，在光照培養箱內培育，每個處理5次重復；采用褐飛虱室內種群生命表法，記錄處理過程中褐飛虱種群的生命參數―各齡期存活率及齡期、成蟲羽化率、雌雄比、長短翅型比、雌蟲壽命，計算種群趨勢指數；

②水稻受害級別：在噴藥24h后用80目紗網罩住盆栽水稻，每穴水稻接入100頭3齡若蟲，每盆300頭，對照用水噴灑，所有供試水稻在自然田間下生長，每個對照和處理20次重復，每24小時檢查一次若蟲的存活情況，并作相應的若蟲補充。分別在水稻接蟲后7d和14d觀察受害級別；

③水稻植株草酸：采用三氯化鈦顯色法測定草酸含量，取農藥處理后7天的水稻植株，稱重后用組織搗碎機破碎后過濾取汁，加入活性炭（加入量為原汁體積的1/4）在常溫下脫色30min，然后用80-2型離心機分離活性炭，離心機轉速為3000?r/min，溶液呈無色或呈乳白色后，取3ml稻汁加入0.15ml濃度為1%三氯化鈦溶）顯色，在分光光度計上于400?nm下測定吸光值，用草酸配制標準曲線，求出回歸方程，由此求出草酸的含量。

本發明表明，井岡霉素、三唑磷兩種農藥使用后，對轉Bt水稻和親本對照水稻上褐飛虱種群的發生和水稻體內抗褐飛虱物質含量的影響存在顯著差異，更切實地評價出了轉Bt基因水稻對非靶標重要害蟲褐飛虱發生危害的生態安全性。