[發明專利]4個聾病易感基因聯合檢測試劑盒及其應用

有效

• 申請號: 201210033159.4
• 申請日: 2012-02-14
• 公開（公告）號: CN102534030A
• 公開（公告）日: 2012-07-04
• 發明（設計）人: 萬戈江;魏宏泉;步訊;夏子芳
• 申請（專利權）人: 北京科聆金儀生物技術有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 北京匯信合知識產權代理有限公司 11335
• 代理人: 王秀麗

1.4個聾病易感基因聯合檢測試劑盒，其特征在于包括DNA聚合酶及其緩沖溶液、擴增各易感基因及Amelogenin基因座的引物、及內標和各基因突變位點對應的基因分型標準物，所述聾病易感基因位點為GJB2235delC，12S?rRNA?1555A＞G、1494C＞T，和IVS7-2A＞G。

2.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于：

用于GJB2235delC檢測的引物為：

SEQ?NO.1：5’-CGCATTATGATCCTCGTTGTGG-3’

SEQ?NO.2：5’-GCTTGATGAACTTCCTCTTCTTCTC-3’；

用于12S?rRNA?1555A＞G突變檢測的引物為：

SEQ?NO.3：5’-AGTGGGTTTGGGGCTAGGTTTAG-3’

SEQ?NO.4：5’-GACGCATTTATATAGAGTAGC-3’；

用于12S?rRNA?1494C＞T突變檢測的引物為：

SEQ?NO.5：5’-AGTGGGTTTGGGGCTAGGTTTA-3’

SEQ?NO.6：5’-GCACACCGCCCGTCTCT-3’；

用于IVS7-2A＞G檢測的引物為：

SEQ?NO.7：5’-CCAGCATTGTAATTTTTTTCCAGG-3’

SEQ?NO.8：5’-GTTTAACATCTTTTGTTTTATTTAG-3’；

其中LNA核苷以斜體字表示。

用于Amelogenin基因座檢測的引物為：

SEQ?NO.9：5’-CCCTGGGCTCTGTAAAGAAT-3’

SEQ?NO.10：5’-GCAGAGCTTAAACTGGGAAGC-3’。

3.根據權利要求1或2所述的試劑盒，其特征在于：所述GJB2235delC，12S?rRNA1555A＞G、1494C＞T，IVS7-2A＞G及Amelogenin基因座的檢測引物，每對引物中有一條引物的5’端進行熒光染料標記。

4.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于：所述GJB2235delC、12S?rRNA1555A＞G、1494C＞T，IVS7-2A＞G及Amelogenin基因座的檢測引物與內標采用不同的熒光染料標記。

5.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于：所述GJB2235delC，12S?rRNA1555A＞G、1494C＞T，IVS7-2A＞G及Amelogenin基因座的復合擴增采用聚合酶鏈式反應來實現，采用多道或單道毛細管電泳進行檢測。

6.權利要求1所述試劑盒應用于聾病易感基因GJB2235delC，12S?rRNA?1555A＞G突變、1494C＞T，IVS7-2A＞G及Amelogenin基因座檢測的方法，其特征在于通過熒光引物PCR及毛細管電泳特異性檢測聾病易感基因及Amelogenin基因座；用于GJB2235delC檢測的引物如SEQ?NO.1、SEQ?NO.2所示；用于12S?rRNA?1555A＞G突變檢測的引物為：SEQ?NO.3和SEQ?NO.4所示；用于12S?rRNA?1494C＞T突變檢測的引物如SEQ?NO.5、SEQ?NO.6所示；用于SLC26A4基因IVS7-2A＞G位點突變檢測的引物為：SEQ?NO.7和SEQ?NO.8所示；用于Amelogenin基因座檢測的引物如SEQ?NO.9、SEQNO.10所示；所述各基因座的復合擴增采用聚合酶鏈式反應來實現，采用多道或單道毛細管電泳進行檢測。